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目的:通过中医理论研究,提高临床辨治结节性甲状腺肿水平;通过对活血消瘿方临床应用经验的研究,提高临床应用能力;通过活血消瘿方对PI3K/Akt信号通路的调控机制研究,探索其作用的具体靶点。方法:(1)理论探讨:通过查阅古今文献,对结节性甲状腺肿的中医病名、病因病机、治疗进行了总结,特别是对痰血瘀阻这一重要病机进行了系统研究。(2)活血消瘿方临床应用经验研究:从其组方、各药药效、药物学、制作工艺、临床应用规律等方面进行了总结。(3)实验研究:将SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为6组,于SPF级实验室中分笼、恒温、恒湿饲养。适应性饲养2周后,予0.1%的PTU溶液灌胃造模8周。自第9周始,给予药物灌胃4周。4周后,腹腔注射麻醉:心脏取血,分离血清,使用Elisa法检测血清TGF-α水平;分离甲状腺组织:取左侧甲状腺一部分用于制作石蜡切片及行TUNEL法检测细胞凋亡,一部分用于行qRT-PCR检测PI3KmRNA、AktmRNA及mTORmRNA表达水平;取右侧甲状腺行Western-Blot检测PTEN、EGFR、ERK1/2、BAX、CyclinD1、FOXO3a蛋白表达情况,收集数据,进行统计学分析。结果:(1)理论研究:甲状腺实性结节可以用“瘿结”命名,以甲状腺结节为主要表现的结节性甲状腺肿可以用“结瘿”命名。正气亏虚是结节性甲状腺肿发生的内因,情志失调是其发生的诱因,饮食起居失常是其高发的重要原因,痰瘀贯穿于其整个病程之中,是其重要的病理环节,也是导致其迁延难愈及复发的潜在因素。痰血瘀阻在结节性甲状腺肿中既有痰瘀同病的一般特点,也具有其自身特点,临床主要表现为:甲状腺肿大、甲状腺局部疼痛、甲状腺结节等。在不同病证中的表现不同,在继发或并发症中的表现不同,病情轻重不同、表现也不同。结节性甲状腺肿痰血瘀阻主要有以下几种形式:肝郁气滞,痰瘀互阻;火毒炽盛,痰凝血瘀;脾虚失运,痰滞血瘀;阴虚火旺,痰结瘀阻;阳虚寒凝,痰瘀内生。在治疗时需:明确痰瘀的主次、轻重及层次;以调气畅志为先;注意饮食宜忌、慎起居;注意兼症的治疗;随症配伍;内外合治、慢病缓图;防变防复。从痰瘀论治结节性甲状腺肿有八大治法:理气化痰活血、活血化痰消瘿、清热化痰活血、健脾化痰活血、养阴化痰活血、温阳化痰活血、化痰活血软坚、宣肺化痰散结,临床需针对具体的疾病进行具体分析,灵活运用。(2)活血消瘿方对病程小于6个月、低回声、囊性、边界清楚、无血供或低血供、结节最大直径小于3厘米的结节性甲状腺肿结节效果较好,疗程以3-6个月为宜。(3)在组织病理学方面:模型组可见:滤泡肿胀,大小差异明显,小部分融合成大泡,大部分变小;上皮排列多不规则,由单层上皮发展为复层上皮,滤泡上皮内伸形成乳头状的复杂结构;局部滤泡增生明显,形成团块,周围血管丰富,表明结甲模型复制成功。药物干预后:滤泡肿胀减小,内部乳头状结构减少,周围增生减少,血管生成减少,上皮细胞排列较为规则,且随着活血消瘿方浓度的增加改善愈加明显。(4)甲状腺细胞凋亡指数(tunel法)检测显示:模型对照组凋亡指数显著降低,与空白对照组相比,差异具有统计学意义(p<0.01),说明在结节性甲状腺肿大鼠模型中存在抵抗凋亡现象。与模型对照组相比,西药组及活血消瘿方干预组,各大鼠甲状腺组织的凋亡指数均显著升高,差异均具有统计学意义(p<0.01)。西药干预组与中药干预组比较:西药组与活血消瘿方高剂量组凋亡指数无统计学差异(p>0.05),而明显高于活血消瘿方低、中剂量组,差异具有统计学意义(p<0.01)。活血消瘿方各剂量组之间比较:呈现剂量依耐性变化,即凋亡指数:高剂量组>中剂量组>低剂量组,差异具有统计学差异(p<0.01)。(5)qrt-pcr法检测各组大鼠甲状腺mrna表达显示:与空白对照组相比,模型对照组pi3kmrna、aktmrna及mtormrna的表达量均升高,差异具有显著统计学意义(p<0.01),说明在结节性甲状腺肿大鼠模型中存在pi3k/akt信号通路的异常激活。与模型对照组相比,活血消瘿方中、高剂量组pi3kmrn、aktmrna及mtormrna的表达量均有所下降,差异具有显著统计学意义(p<0.01);西药干预组及活血消瘿方低剂量组变化均不明显,差异无统计学意义(p>0.05)。西药干预组与中药干预组相比:西药干预组与活血消瘿方低剂量组差异无统计学意义(p>0.05),与活血消瘿方中、高剂量组差异具有显著统计学意义(p<0.01)。中药各干预组之间比较:高剂量组优于中剂量组,中剂量组优于低剂量组,差异具有显著统计学差异(p<0.01)。(6)western-blot法检测大鼠甲状腺组织相关蛋白表达显示:与空白对照组相比,模型对照组pten、bax及foxo3a蛋白的表达量均降低,差异具有显著性统计学意义(p<0.01)。与模型对照组相比:活血消瘿方中、高剂量干预组pten、bax及foxo3a蛋白表达量均有所上升,差异具有显著统计学意义(p<0.01);活血消瘿方低剂量组与西药干预组pten、bax及foxo3a蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义(p>0.05)。西药干预组与中药干预组相比:西药组与活血消瘿方低剂量组差异无统计学意义(p>0.05),与活血消瘿方中、高剂量组差异具有显著统计学意义(p<0.01)。中药各干预组之间比较:高剂量组优于中剂量组,中剂量组优于低剂量组,差异具有显著性统计学差异(p<0.01)。与空白对照组相比:模型对照组egfr、erk1/2及cyclind1蛋白的表达量均升高,差异具有统计学意义(p<0.01)。与模型对照组相比:活血消瘿方中、高剂量组egfr、erk1/2及cyclind1蛋白表达量均下降,差异具有显著统计学意义(p<0.01);西药干预组及活血消瘿方低剂量组下降不明显,差异无统计学意义(p>0.05)。西药干预组与中药干预组相比:西药干预组与活血消瘿方低剂量组差异无统计学意义(p>0.05),与活血消瘿方中、高剂量组差异具有显著统计学意义(p<0.01)。中药各干预组之间比较:高剂量组优于中剂量组,中剂量组优于低剂量组,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。(7)Elisa法检测大鼠血清TGF-α显示:与空白对照组相比,模型对照组血清TGF-α升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组相比:活血消瘿方中、高剂量干预组血清TGF-α均下降,差异具有显著统计学意义(P<0.01);西药干预组及活血消瘿方低剂量组下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。西药干预组与中药干预组相比:西药干预组与活血消瘿方低剂量组差异无统计学意义(P>0.05),与活血消瘿方中、高剂量组差异具有显著统计学意义(P<0.01)。中药各干预组之间比较:高剂量组优于中剂量组,中剂量组优于低剂量组,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:(1)结节性甲状腺肿中医理论体系完善,痰血瘀阻的病机理论对于临床论治具有重大的指导意义;(2)活血消瘿方理法方药完备,工艺完善,特色明显,值得进一步推广应用;(3)结节性甲状腺肿模型大鼠存在凋亡抵抗现象,而P13K/Akt信号通路的激活可能是其抵抗凋亡的具体机制之一;(4)活血消瘿方可通过调控P13K/Akt信号通路相关基因及蛋白的表达而诱导凋亡、抑制增殖,进而发挥治疗及防治恶变的作用,具体机制为:通过升高PTEN蛋白的表达,防止结节恶变;升高血清TGF-α水平,继而激活EGFR的表达,抑制PI3K/Akt信号通路激活,上调FOXO3a蛋白的表达,抑制CyclinD1的活性,延缓细胞生长,抑制增殖;促进BAX蛋白表达,诱导凋亡的发生;下调ERK1/2蛋白表达,抑制CyclinD1的活性,激活FOXO3a的表达而抑制增殖;下调mTOR基因的表达,抑制与增殖有关蛋白质的翻译,抑制细胞增殖。