【摘 要】
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目的:用 H2O2诱导人脐静脉内皮细胞株凋亡建立氧化应激模型,观察咖啡酸(Caffeic acid,CA)对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12)凋亡的保护作用并初步探讨其机制。 方
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目的:用 H2O2诱导人脐静脉内皮细胞株凋亡建立氧化应激模型,观察咖啡酸(Caffeic acid,CA)对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12)凋亡的保护作用并初步探讨其机制。 方法:分别用不同浓度的咖啡酸和H2O2处理 HUVEC-12,通过MTT法检测细胞的活力,流式细胞术鉴定内皮细胞凋亡率,用吖啶橙溴化乙啶荧光染色(AO-EB染色)观察细胞凋亡形态,RT-PCR及Western blot分别检测NF-κB、P53和Bcl-2的基因和蛋白表达。为了检测H2O2或CA对内皮细胞作用的量效关系,分别用0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mmol/L的H2O2或0.1,1.0,10,100μmol/L的CA作用细胞24小时;同时,为了检测H2O2或CA对内皮细胞作用的时效关系,采用上述浓度的H2O2或CA分别对细胞作用3、6、12、24和48小时。 结果:用不同浓度 H2O2(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol/L)孵育细胞24小时后,细胞存活率随药物浓度的增加依次下降;0.2 mmol/L H2O2孵育细胞24小时后,NF-κB基因和蛋白表达呈浓度依赖性上调,加入NF-κB阻断剂PDTC(100μmol/L)后,细胞形态发生明显改变,凋亡细胞减少,同时P53表达下调,Bcl-2表达上调。和不同浓度咖啡酸共同孵育细胞24小时,MTT提示,咖啡酸能明显减轻H2O2对HUVEC-12的损伤,提高细胞的存活率,流式细胞检测术提示咖啡酸能使H2O2诱导的HUVEC-12凋亡率由32.8％±3.2%降至10.7%±1.9%。同时NF-κB和P53表达下调,Bcl-2表达上调。 结论:CA有抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡的作用,其机制可能与调节NF-κB,P53,和Bcl-2基因和蛋白的表达有关。
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