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第一部分：胆固醇代谢相关基因CYP46和ABCA1多态性与散发性阿尔茨海默病的相关性分析
目的
探讨胆固醇24S-羟化酶(cholesterol 24S-hydroxylase，CYP46)基因第2内含子A/G多态性位点和三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP-binding cassettetransporter A1，ABCA1)基因第6外显子G/A(R219K)多态性位点与散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer’s disease，SAD)发病的关系。
方法
采用病例-对照研究方法，利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技术对168例SAD患者和215名健康对照的CYP46和ABCA1基因多态性进行检测，比较患者和对照组之间等位基因频率和基因型分布的差异，并评价不同基因型与SAD发病风险之间的关系。统计学处理采用SPSS11.5统计软件。
结果
CYP46基因第2内含子A/G多态性等位基因频率和基因型分布在SAD组和正常对照组差异无统计学意义。ABCA1基因第6外显子G/A多态性的基因型分布在两组之间差异有统计学意义(x<2>=8.230，P=0.016)，SAD组携带A等位基因(GA+AA基因型)的频率明显低于对照组(61.3﹪vs.73.5﹪，x<2>=6.444.P=0.011)。Logistic回归分析表明携带A等位基因者(GA+AA基因型)比携带GG基因型者SAD发病风险降低43﹪(校正后OR=0.57，95﹪CI=0.36～0.91.P=0.019)，而AA纯合子比携带GG基因型者SAD发病风险降低60﹪(校正后OR=0.40，95﹪C/=0.21～0.77，P=0.006)。
结论
CYP46第2内含子A/G多态性可能与SAD发病无关；而ABCA1基因第6外显子G/A多态性与SAD相关，携带A等位基因或AA基因型对SAD发病可能有一定的保护作用。
第二部分：降低细胞胆固醇水平对β-淀粉样肽生成的影响
目的
以过量表达人野生型淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，APP)的SH-SY5Y细胞为模型，观察降低细胞胆固醇水平对β-淀粉样肽(β-amyloid，Aβ)生成的影响，初步探讨胆固醇在阿尔茨海默病(AlzheimeT’sdisease，AD)发病中的作用。
方法
首先利用脂质体转染法将野生型APP<,751>基因片段转入SH-SY5Y细胞，筛选出稳定表达野生型APP<,751>的细胞克隆并进行鉴定。然后以此细胞系为模型，分别给予β-甲基环糊精(methyl-β-cyclodextrin，M[3CD)或洛伐他汀对细胞系进行处理；采用噻唑蓝比色法观察其对细胞活力的影响，胆固醇定量试剂盒测定胆固醇水平的变化，放射免疫法测定Aβ的含量，Western Blot法半定量检测全长型APP、可溶性APPα(α-secretase cleaved soluble APP,sAPPa)和APPβ位点裂解酶(β-site APP cleaving enzyme，BACEl)的含量，BACE1活性检测试剂盒检测BACE1活性改变。统计学处理采用SPSS11.5统计软件。
结果
成功建立了过量表达野生型APP<,751>的SH-SY5Y细胞模型。以此细胞模型为研究对象，结果显示10mmol/L MβCD组和5μmol/L洛伐他汀组与各自对照组相比，分别降低细胞胆固醇水平66.4﹪和43.6﹪(P<0.05)；细胞培养液中Aβ含量分别降低39.5﹪(t=3.346，P=0.007)和25.7﹪(t=4.587，P=0.001)；sAPPα含量分别增加3.5倍(t=9.327，P=0.000)和2.0倍(t=4.278，P=0.005)；洛伐他汀组BACE1活性降低36.6﹪(t=4.787，P=0.001)，而MβCD组BACE1活性下降无统计学意义(t=0.814，P=0.435)；两组全长型APP和BACE1蛋白的表达量与对照组相比差异没有统计学意义(P>0.05)。
结论
降低细胞胆固醇水平使细胞外Aβ含量减少，伴sAPPα含量增加，这提示降低胆固醇可能通过影响APP代谢，参与AD的发病。他汀类药物可能通过抑制BACEl活性来减少Aβ生成。