猪附红细胞体病诊断方法的研究

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本研究包括两个试验:试验一,猪附红细胞体病形态学诊断方法的研究;试验二,猪附红细胞体病PCR诊断方法的研究。试验一猪附红细胞体病形态学诊断方法的研究包括生理盐水压片、血涂片的瑞氏、姬姆萨氏以及吖啶橙染色方法的研究、在电镜下观察猪附红细胞体的形态。其中生理盐水压片在光镜下可见附红细胞体多为环形、球形、短杆形、哑铃状或星状的闪光小体,附着于红细胞表面单个或成团寄生,呈链状或鳞片状。严重感染病例的一个红细胞上附红细胞体数量可达20个以上,此时红细胞在光学显微镜下犹如布满突起的蓖麻球和菠萝状。瑞氏染色后在光学显微镜下观察,可见红细胞较大,红细胞和附红细胞体均为深蓝紫色,附红细胞体着色较深,在星形红细胞的突出部位或红细胞表面,每个红细胞上有3-8个不等的附红细胞体。姬姆萨氏染色后在光学显微镜下观察,可在红细胞表面上可见到0.5-1.5μm的蓝紫颗粒,呈圆形、逗号状,每个红细胞上可出现多个。吖啶橙染色后在荧光显微镜下观察,可见在大多数红细胞边缘及表面上可看到一些明亮的小体,直径1μm左右,为被吖啶橙染色的附红细胞体。将所采取的血液处理后在扫描电镜下观察,可见红细胞为典型的星形,附红细胞体呈球形、纺锤形附着于红细胞的表面。一个红细胞上可附着一个或多个。试验二猪附红细胞体病PCR诊断方法的研究以无菌法采取自然发病的猪附红细胞体病的血液,用阿氏液抗凝后提取模板。在GENBANK中查询猪附红细胞体16SrRNA基因,依序列代号为AY492086的基因序列设计一对引物,用优化的50μl反应体系在PCR仪上进行反应,所获得产物用0.8%的琼脂糖凝胶进行电泳以确定扩增片段的大小。结果获得484bp的反应产物,与预计的片段大小相吻合,由此证明了PCR方法在诊断该病上是可行的。与吖啶橙染色的符合率达95%
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