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目的：稽留流产是产科常见的病理性妊娠之一,病因复杂,发病机制尚不明确。生殖免疫学认为,稽留流产是母胎间的免疫平衡失调,母体对胎儿组织产生免疫排斥的结果。Toll样受体4(TLR4)是天然免疫系统中的一类重要模式识别受体,研究发现滋养细胞能够表达TLR4。TLR4通过一系列跨膜信号转导激活核因子-κB(NF-κB),引起大量炎症因子的合成和释放,发挥天然免疫和获得性免疫作用。近年发现人β防御素2(HBD2)具有直接杀伤细菌和抗病毒等活性,在绒毛组织的天然免疫中发挥重要作用,同时对维持妊娠的成功起关键作用。稽留流产发病机制的研究一直是国内外产科领域的热点,然而目前HBD2和TLR4在妊娠及病理妊娠中的研究报道较少,其中HBD2与流产的关系未见报道。为探明TLR4、NF-κB、HBD2在稽留流产与正常早期妊娠女性绒毛组织中的表达情况,本研究采用RT-PCR和ELISA方法对其mRNA和蛋白含量进行了检测,以探讨TLR4、NF-κB和HBD2在稽留流产发病过程中的作用。
方法：⑴选取2010年3月至12月在郑州大学第一附属医院妇产科门诊就诊的符合纳入标准的稽留流产患者和同期自愿要求终止妊娠的正常早期妊娠女性各30例,稽留流产患者作为流产组,正常早期妊娠女性作为健康孕妇组,分别于负压吸引术时留取绒毛组织。⑵采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测绒毛组织中TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和HBD2 mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测绒毛组织中TLR4和HBD2的蛋白含量,并对其mRNA和蛋白水平行相关性分析。⑶采用SPSS17.0软件分析,计量数据用-x±s表示,根据正态分布及方差齐性检验结果,统计方法用t检验,Pearson相关性检验分析,检验水准为α=0.05,P＜0.05为差异有统计学意义。
结果：①TLR4 mRNA在流产组的相对表达水平(1.01±0.14)高于健康孕妇组(0.70±0.12),差异有统计学意义(P＜0.01)。②NF-κB mRNA在流产组的相对表达水平(0.83±0.11)高于健康孕妇组(0.77±0.11),差异有统计学意义(P=0.020)。③HBD2 mRNA在流产组的相对表达水平(0.44±0.05)高于健康孕妇组(0.40±0.06),差异有统计学意义(P=0.003)。④TLR4蛋白在流产组的表达量(5.47±0.57)ng/g高于健康孕妇组(4.93±0.74)ng/g,差异有统计学意义(P=0.002)。⑤HBD2蛋白在在流产组的表达量(3.28±0.74)ng/g高于健康孕妇组(2.73±0.65)ng/g,差异有统计学意义(P=0.003)。⑥流产组TLR4 mRNA和NF-κB mRNA表达呈正相关(r=0.638,P＜0.01),TLR4 mRNA和HBD2 mRNA表达呈正相关(r=0.723,P＜0.01),NF-κB mRNA和HBD2 mRNA表达呈正相关(r=0.532,P=0.002),TLR4和HBD2的蛋白表达水平之间呈正相关(r=0.813,P＜0.01),健康孕妇组各因子间未见相关性(P＞0.05)。
结论：⑴TLR4、NF-κB和HBD2在稽留流产患者绒毛组织中的表达高于正常早期妊娠女性。⑵TLR4、NF-κB和HBD2的表达增高可能是稽留流产发病机制中的关键环节之一。⑶TLR4、NF-κB和HBD2在稽留流产中表达呈正相关,提示TLR4/NF-κB/HBD2信号转导通路可能参与了稽留流产的发生,是其重要的致病机理。