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目的:通过体外研究三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞株的作用,探讨三氧化二砷对人肺腺癌A549细胞株增殖抑制和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及其可能的机制。 方法: (1)人肺腺癌细胞培养:将冰冻人肺腺癌A549细胞在水溶中不断振动,在1-2分钟后完全解冻,离心3分钟,吸去上清液,加入10ml10%小牛血清(FBS) RPMI1640培养液(含青霉素100U/ml,链霉素100mg/ml),吹打成细胞悬液,移入细胞培养瓶内,放入5%二氧化碳浓度、37℃的恒温孵箱中进行培养。 (2)人肺腺癌细胞A549的传代:吸去细胞培养液,用PBS液冲洗两遍,用0.25%的胰蛋白酶消化细胞3分钟,待细胞变亮变圆,加入RPMI1640培养液,终止消化,反复吹打,分别加入两个培养瓶,再加入2mlRPMI1640培养液,放置在暖箱中进行培养,隔日换液,细胞长满后连续传代,取成对数生长期的细胞进行实验。 (3)根据实验需要分别将三氧化二砷配制成需要的实验浓度(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、10μmol/L),三氧化二砷各浓度作用人肺腺癌A549细胞的时间设置为24小时、48小时和72小时,每个时间点按药物浓度分成五组,分别为第2组(1μmol/L)、第3组(2μmol/L)、第4组(4μmol/L)、第5组(8μmol/L)、第6组(10μmol/L)和对照组(第1组),每6孔为一组。待各药物浓度作用于细胞24小时、48小时、72小时实验时间后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)进行检测,分别检测对照组和各实验组的吸光度(IOD)值,计算细胞抑制率。 (4)选择三氧化二砷的各药物浓度对人肺腺癌A549细胞具有最佳的抑制作用时间(48小时),采用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测各组VEGF的含量变化,将对照组与实验组细胞上清液中VEGF的含量进行比较。 结果: (1)在24h时,对照组IOD值为0.319±0.085,抑制率为0;五个实验浓度组的三氧化二砷(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、10μmol/L)作用人肺腺癌A549细胞,其IOD值分别为0.291±0.221,0.248±0.017,0.217±0.010,0.195±0.007,0.162±0.015;细胞抑制率分别为8.75%,22.30%,31.96%,39.01%,49.35%;各实验组与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。 (2)在48h时,对照组IOD值为0.789±0.058,抑制率为0;五个实验浓度组的三氧化二砷(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、10μmol/L)作用人肺腺癌A549细胞,其IOD值分别为0.649±0.047,0.560±0.024,0.452±0.025,0.366±0.034,0.284±0.039;细胞抑制率分别为17.66%,29.01%,42.65%,53.61%,63.93%;各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。 (3)在72h时,对照组IOD值为1.004±0.098,抑制率为0;五个实验浓度组的三氧化二砷(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、10μmol/L)作用人肺腺癌A549细胞,其IOD值分别为0.856±0.027,0.778±0.042,0.635±0.050,0.542±0.022,0.470±0.036;细胞抑制率分别为14.78%,22.52%,36.79%,45.96%,53.24%;各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。 (4)采用酶联免疫吸附法(Enzyme LinkedImmunosorbent Assay,ELISA)检测48h时对照组中VEGF的含量为218.854±7.523,五个实验组VEGF的含量分别为194.968±6.990,181.428±6.661,112.761±15.146,93.706±7.002,85.968±3.150,各实验组与对照组比较及各组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1.As2O3能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,并且抑制率随着As2O3浓度的升高而升高,呈浓度依赖性,并且与时间有关系,实验证明抑制作用在48小时最明显。 2.As2O3可能通过抑制人肺腺癌A549细胞中VEGF的含量来抑制人肺腺癌细胞的生长,为As2O3用于临床防治肺癌提供了理论依据。