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第一部分人亲磷酸酯酶A1基因的克隆及序列分析目的克隆人亲磷酸酯酶A1(phosphatidic acid-preferring phospholipase A1,PA-PLA1)基因,获mRNA全长序列,并通过分析所编码氨基酸的序列特征为从分子水平上研究PA-PLA1生理功能提供理论依据。方法从人的肝脏组织中提取RNA,逆转录为cDNA。PCR扩增该基因片段,cDNA末端快速扩增技术扩增该基因末端,克隆测序后获得PA-PLA1基因mRNA全长序列。Vector NTI 8.0拼接序列并进行序列比对,DNASTAR构建系统树。登录NCBI用人类基因组数据库做BLAST分析,ORF finder预测PA-PLA1的编码框。结果PA-PLA1基因mRNA全长为2923bp,编码区长2238bp,编码一个由745个氨基酸残基组成的蛋白多肽,分子量为83141道尔顿,等电点为5.64。全序列与人脂肪酶家族序列差异较大,与KIAA0725蛋白及P125蛋白具一定同源性。氨基酸序列中具有与酶活性相关的保守序列Ser408-His-Ser410-Leu-Gly412, Glu448-Ala475区可形成卷曲螺旋区域,且N末端可形成具DDHD结构域。结论获得人PA-PLA1基因mRNA全长序列。序列分析研究显示人PA-PLA1的功能可能与细胞内信号传导有关。第二部分PA-PLA1基因表达与胰岛素分泌关系的初步研究目的研究PA-PLA1基因在小鼠胰岛β细胞株MIN6中的表达与胰岛素分泌的关系。方法以不同浓度及不同时间分别对MIN6细胞行葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,放免法测定细胞上清液中胰岛素分泌量,实时荧光定量PCR检测相应条件下PA-PLA1 mRNA的表达水平,线性相关分析PA-PLA1 mRNA表达水平与胰岛素分泌的相关性。结果在一定葡萄糖浓度范围内,PA-PLA1 mRNA水平随着葡萄糖浓度升高和刺激时间的延长而升高,并与细胞胰岛素分泌量呈现明显的正相关,不同葡萄糖浓度和不同刺激时间的PA-PLA1 mRNA水平与胰岛素水平的相关系数r分别为0.8839(P<0.01)和0.981 (P<0.01)。结论小鼠胰岛β细胞株MIN6中PA-PLA1基因的表达与胰岛素分泌有关并呈正相关性。