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肺癌是全世界发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中80％以上为非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）。吉非替尼（Gefitinib，Gef）是NSCLC治疗中的第一个分子靶向药物，具有特异性强，耐受性好，不良反应少的优点。但多数患者在治疗数月后会产生获得性耐药，导致病情恶化。因此，探讨产生Gef获得性耐药的机制并寻求新的治疗策略是目前NSCLC治疗领域中亟待解决的关键问题。 研究显示，Notch-1信号通路与肿瘤的发生、发展及耐药性密切相关，其可通过上皮-间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT）这一途径影响肿瘤的多药耐药。考布他汀A4磷酸酯（Combretastatins A4 phosphate，CA4P）为考布他汀A4（Combretastatins A4，CA4）的水溶性磷酸盐前体药物，可通过干扰微管蛋白的聚集，选择性地靶向破坏肿瘤血管结构的完整性，从而产生抗肿瘤效应，目前CA4P已进入肿瘤治疗的临床试验阶段。 本研究旨在探讨CA4P联合Gef对NSCLC的增殖、凋亡、细胞周期、迁移的作用以及两药联合能否通过抑制 Notch-1/Snail信号通路逆转 EMT，增加NSCLC对Gef的敏感性，为克服NSCLC治疗中Gef的耐药问题提供新的治疗策略。本研究分为以下两个部分： 第一部分 目的：探讨CA4P与Gef联用对H1975细胞的增殖、凋亡、细胞周期及迁移的作用。 方法：CA4P、Gef单用或两药按不同方式合用，作用于T790M突变耐药的H1975细胞，观察细胞的形态特征；MTT法检测CA4P、Gef单用或两药合用对细胞的增殖抑制作用，并计算其联合指数（Combination index，CI），评价不同给药方式产生的效果；流式细胞术检测凋亡率和细胞周期；划痕实验检测细胞的迁移能力。 结果：采取不同方式给药以评价两药的联合效应。结果显示，与Gef单用组相比，CA4P+Gef组耐药逆转倍数约为155倍，且协同指数最小（CI<1），说明两药合用的效果受序贯或联合不同给药方式的影响，以CA4P+Gef联合用药的方式协同作用最强。镜下观察发现，H1975细胞形态多数呈不规则梭型，细胞间紧密连接，CA4P、Gef单药及两药联合后，细胞形态多由不规则梭型变成形态规则的多边形，细胞数量也明显减少，说明CA4P、Gef单药及两药联合均能抑制H1975细胞生长，且两药联合组的抑制效果强于单药组。检测细胞的凋亡率结果显示，与对照组相比，Gef单用组细胞凋亡率无明显变化，CA4P单用组细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）；与CA4P、Gef组相比，CA4P+Gef组细胞凋亡率均有显著性升高（P＜0.01），表明CA4P联合Gef可协同促进H1975细胞凋亡。流式细胞术检测细胞周期结果显示，与对照组相比，Gef单用组各细胞周期中的细胞比例无显著变化，而CA4P单用组G0/G1期、S期细胞比例显著降低，G2/M期细胞比例显著升高（P＜0.01）；与CA4P、Gef单用组相比，CA4P+Gef联合组G0/G1期、S期比例降低，G2/M期比例升高（P＜0.01），说明单用Gef对H1975细胞周期无明显影响，CA4P联合Gef可显著诱导H1975细胞周期阻滞于G2/M期。划痕实验结果显示，与对照组相比，CA4P、Gef单用组细胞迁移率显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；与CA4P、Gef组相比，CA4P+ Gef组细胞迁移率进一步降低（P＜0.01），说明两药联合可协同抑制H1975细胞的迁移能力。 结论： CA4P与Gef联合用药可协同抑制H1975细胞的增殖、诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期并抑制其迁移能力。 第二部分 目的：探讨CA4P联合Gef对H1975细胞Notch-1与Snail蛋白表达的影响，为克服NSCLC治疗中的Gef耐药提供实验依据。 方法：取对数生长期的H1975细胞，分别用CA4P10nM、Gef2μM及CA4P10nM+Gef2μM孵育细胞48h，采用Western blotting法检测H1975细胞Notch-1、Snail蛋白表达。 结果：与对照组比较，Gef组Notch-1与Snail蛋白的表达无明显变化，CA4P组、CA4P+Gef组的Notch-1与Snail蛋白表达均明显降低（P＜0.01），CA4P+Gef组与CA4P、Gef组比较，Notch-1与Snail蛋白表达明显降低（P＜0.01）。 结论：CA4P联合Gef可降低Notch-1与Snail蛋白表达水平，提示两药联合可通过调节Notch-1/Snail信号通路，增强对Gef的敏感性，协同抑制H1975细胞的增殖，促进其凋亡，阻滞细胞周期以及抑制其迁移能力，从而克服NSCLC治疗中的Gef获得性耐药。