论文部分内容阅读
目的:建立用水抽提加大孔树脂吸附法提取望江南中总蒽醌苷的工艺；初步探讨了望江南总蒽醌苷对肿瘤细胞增殖抑制的广谱性,并深入研究了望江南总蒽醌苷体内外的抗肿瘤活性；对小鼠免疫细胞增殖的影响以及对环磷酰胺(CTX)造成的免疫低下小鼠的保护作用。
方法:先用水煎煮粉碎的干燥望江南茎得到粗提物,再用D型大孔树脂二次提纯得到精制品,再经过高速离心制得高纯度样品,测定望江南总蒽醌苷浓度后,配制成适合浓度的水溶液备用。利用MTT法检测望江南总蒽醌苷对人肺癌细胞A549、小鼠肉瘤S180腹水型肿瘤细胞、鼠肝癌细胞HepS等肿瘤细胞和人正常肝细胞L-02增殖的影响,并用DNA凝胶电泳法检测不同剂量(1.5625、3.125、6.25、12.5、25μg／mL)的望江南总蒽醌苷对HepS细胞凋亡的影响；从HepS肝癌小鼠腹腔抽取对数生长期的肿瘤细胞,皮下注射形成实体瘤模型,连续用药12天后,检测三个剂量(0.4mg／Kg·d、0.2mg／Kg·d、0.1mg／Kg·d)蒽醌苷对实体瘤模型鼠瘤重、胸腺指数和脾指数的影响；利用MTT法检测不同剂量的蒽醌苷对小鼠胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞增殖的影响；小鼠腹腔注射环磷酰胺形成免疫抑制模型,连续用药10天后,观察三个剂量水平(150μg／kg、75μg／kg、37.5μg／kg)的蒽醌苷对模型小鼠的免疫活性的影响,检测的免疫指标包括白细胞数、腹腔巨噬细胞的吞噬百分率、脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖活力、脾指数和胸腺指数。结果:HPLC和纸层析结果显示江南总蒽醌苷是混合蒽醌苷,酸解后水解为大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等游离蒽醌苷元和葡萄糖、鼠李糖。体外抗肿瘤活性表明,望江南总蒽醌苷对鼠肝癌细胞HepS、人肺癌细胞A549、小鼠肉瘤S180腹水型肿瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用,而对人正常肝细胞L-02在低浓度时能够促进细胞的增殖,在高浓度时抑制细胞的增殖；在浓度为1.5625、3.125、6.25、12.5μg／mL能够促进鼠肝癌细胞HepS的凋亡或坏死。体内抗肿瘤实验表明,望江南总蒽醌苷能抑制HepS实体瘤生长,提高脾脏指数和胸腺指数,增强小鼠的体液免疫和细胞免疫功能。望江南总蒽醌苷能直接促进正常小鼠的胸腺和脾淋巴细胞增殖。与CTX对照组相比,望江南总蒽醌苷的三个剂量组均能升高外周血白细胞数,显著增加腹腔巨噬细胞吞功能,增加脾指数并促进模型鼠脾淋巴细胞的增殖；中高剂量望江南总蒽醌苷能够显著的增加胸腺指数并促进胸腺淋巴细胞的增殖。
结论:望江南总蒽醌苷提取工艺可靠。望江南总蒽醌苷在体内外均具有显著的抗肿瘤活性,对多种肿瘤细胞有效；望江南总蒽醌苷很好保护了由环磷酰胺造成的免疫抑制模型鼠的免疫系统。其抗肿瘤的机制可能是诱导细胞凋亡和提高机体免疫力并存,具体机制还有待进一步研究。