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第一部分静脉麻醉药对小鼠海马脑片细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化水平的影响
目的：本实验拟应用小鼠海马脑片研究静脉麻醉药对ERK1/2磷酸化水平的影响以及其影响机制，从分子水平探讨静脉麻醉药影响学习记忆功能的可能机制。
方法：BALB/C小鼠，雌雄不拘，迅速断头取脑，将其海马切成450um厚的脑片。根据量效试验、时效试验及各药物干预试验将脑片分别随机分组，每组8片。量效实验分别应用10-9～10-4M静脉麻醉药36℃恒温孵育海马脑片1h。时效实验应用5μM异丙酚孵育脑片，分别于药物孵育1、2、5、7、9、12、15、30、60min取出脑片；部分脑片药物孵育5min后洗出异丙酚，分别于洗出2、4、7、10、25min取出脑片。各药物干预组则先应用各药物预孵育海马脑片1小时，然后应用浓度为5μM的各静脉麻醉药孵育脑片1小时后取出脑片。应用SDS-PAGE和Westernblot等生化技术，并结合GelDoc凝胶成像系统，半定量检测小鼠海马内p-ERK1/2的磷酸化水平。
结果：(1)静脉麻醉药异丙酚、咪达唑仑、依托咪酯和氯胺酮抑制ERK1/2的磷酸化水平。(2)异丙酚对ERK1/2磷酸化水平的抑制是可逆的。(3)PKC阻滞剂Chelerythrin100μM明显增强静脉麻醉药诱导的ERK1/2磷酸化水平的抑制。(4)PKC兴奋剂PMA0.1μM有效阻断静脉麻醉药诱导的ERK1/2磷酸化水平的抑制。(5)PLC阻滞剂U7312250μM阻断静脉麻醉药诱导的ERK1/2磷酸化水平的抑制。(6)PLC兴奋剂carbachol100μM增强静脉麻醉药诱导的ERK1/2磷酸化水平的抑制。(7)NMDA受体阻滞剂MK80110μM增强静脉麻醉药诱导的ERK1/2磷酸化水平的抑制作用较弱。(8)NMDA1mM阻断静脉麻醉药诱导的ERK1磷酸化水平的抑制，对静脉麻醉药诱导的ERK2磷酸化水平的抑制影响较弱。(9)MEK阻滞剂PD-9805920μM增强静脉麻醉药诱导的ERK1/2磷酸化水平的抑制。
结论：本研究应用小鼠海马脑片来研究静脉麻醉药对细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化水平的影响。我们发现临床相关浓度的静脉麻醉药抑制小鼠海马脑片ERK1/2的磷酸化水平，且异丙酚对小鼠海马脑片细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化水平的抑制作用是可逆的。这些抑制效应可能通过PLC-PKC旁路介导，NMDA受体也参与静脉麻醉药诱导的ERK1磷酸化水平的抑制。这些发现支持对细胞外信号调节激酶的磷酸化水平的抑制是静脉麻醉药对中枢神经系统麻醉作用的机制之一。
第二部分静脉麻醉药对小鼠海马脑片cAMP反应元件结合蛋白磷酸化水平的影响
目的：本实验拟应用小鼠海马脑片研究静脉麻醉药对CREB磷酸化水平的影响及其影响机制，从分子水平探讨静脉麻醉药影响学习记忆功能的机制。
方法：BALB/C小鼠，雌雄不拘，迅速断头取脑，将其海马切成450um厚的脑片。根据量效试验、时效试验及各药物干预试验将脑片分别随机分组，每组8片。量效实验分别应用10-9～10-4M静脉麻醉药36℃恒温孵育海马脑片1h。时效实验应用5μM异丙酚孵育脑片，分别于药物孵育1、2、5、7、9、12、15、30、60min取出脑片；部分脑片药物孵育5min后洗出异丙酚，分别于洗出2、4、7、10、25min取出脑片。各药物干预组则先应用各药物预孵育海马脑片1小时，然后应用浓度为5μM的各静脉麻醉药孵育脑片1小时后取出脑片。应用SDS-PAGE和Westernblot等生化技术，并结合GelDoc凝胶成像系统，半定量检测小鼠海马内p-CREB的磷酸化水平。
结果：(1)静脉麻醉药异丙酚、咪达唑仑、依托咪酯和氯胺酮抑制CREB的磷酸化水平。(2)异丙酚对CREB磷酸化水平的抑制是可逆的。(3)PKC阻滞剂Chelerythrin100μM增强静脉麻醉药诱导的CREB磷酸化水平的抑制。(4)PKC兴奋剂PMA0.1μM有效阻断静脉麻醉药诱导的CREB磷酸化水平的抑制。(5)PLC阻滞剂U7312250μM对各静脉麻醉药诱导的CREB磷酸化水平的抑制影响不明显。(6)PLC兴奋剂carbachol100μM部分增强静脉麻醉药诱导的CREB磷酸化水平的抑制。(7)NMDA受体阻滞剂MK80110μM对静脉麻醉药诱导的CREB磷酸化水平的抑制作用无影响。(8)NMDA1mM阻断静脉麻醉药诱导的CREB磷酸化水平的抑制，影响较弱。(9)MEK阻滞剂PD-9805920μM增强静脉麻醉药诱导的CREB磷酸化水平的抑制。
结论：本研究应用小鼠海马脑片来研究静脉麻醉药对CREB磷酸化水平的影响，我们发现临床相关浓度的静脉麻醉药抑制小鼠海马脑片的CREB的磷酸化水平，且这些效应可能通过PKC旁路和MAPK旁路介导。这些发现支持这一观点，cAMP反应元件结合蛋白的磷酸化是静脉麻醉药对中枢神经系统麻醉作用的机制之一。