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背景MicroRNAs即微小RNA(miR),是一种全长大约为21~25个核苷酸、在哺乳动物基因组中广泛存在的具有高度的保守性的非编码小RNA,通过结合目标mRNA的3’未翻译区域,对其进行负调控表达(主要产生裂解或转化抑制),在动物和植物中发挥重要的调节作用,miR是多细胞生物中较丰富的基因调控分子,对许多蛋白质编码基因的输出产生影响。作为内分泌系统中最常见的恶性肿瘤,甲状腺癌在所有头颈部肿瘤中占比达三分之一,已成为医学界关注的重点与热点问题,近年来发病率也呈持续上升趋势;其中最常见的又数甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma简称PTC),它占到所有甲状腺癌病例的80-85%。PTC的发病及发展过程一般较为隐匿,多数无明显症状及体征、仅由体检检出,一部分患者出现明显症状多因肿瘤生长过大、局部侵犯或远处转移所致,此时运用传统的治疗手段作用较为有限、预后较差。因此,如何有效治疗PTC患者,探索PTC发生发展的内在机制,为分子靶向治疗提供可靠证据一直是亟待解决的问题。已有研究证实多种肿瘤的发展与microRNAs失调有关,microRNAs的异常表达能使肿瘤的分化、增殖、凋亡等重要过程产生变化,在肿瘤的发生发展中扮演重要角色,在肿瘤的诊断、治疗及预后等方面存在极大价值,其中包括甲状腺乳头状癌(PTC)。microRNA-150在多种肿瘤的研究中被发现发生异常表达,但miR-150与甲状腺乳头状癌的相关研究还十分有限;本研究旨在观察miR-150在不同组织中的表达及其在PTC细胞株TPC-1中对肿瘤增殖、凋亡的影响并探讨其中的机制。目的本实验通过观察microRNA-150(mi R-150)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织和正常甲状腺组织中的表达,及miR-150对甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1生物学行为产生的影响。方法1.选取2016年8月至11月中就诊于郑州大学第一附属医院甲状腺外科、初次接受甲状腺手术且术前均未曾接受放射性131I治疗的患者40例;术前与患者及家属积极沟通,患者及家属均对取材和研究均知情同意,术中经两名病理医师诊断为甲状腺乳头状癌,所有甲状腺癌组织及癌旁正常甲状腺组织标本均在手术中获得并妥善保存。通过实时荧光定量PCR分别检测不同分期的PTC组织及癌旁正常甲状腺组织中的miR-150表达水平并进行比较分析。2.慢病毒质粒的构建(1)构建microRNA-150过表达的慢病毒质粒;(2)用脂质体2000(LipofectaminTM 2000)分别将miR-150类似物(miR-150 mimics)及空白载体(mi R-150 scramble)稳定转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株中。3.mi R-150对甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1生物学行为产生的影响(1)通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测miR-150对于TPC-1细胞增殖的影响;(2)通过流式细胞仪技术检测miR-150对于TPC-1细胞凋亡的影响。结果1.PTC组织中miR-150的表达水平(0.5738±0.0509)显著低于癌旁组织中的水平(1.7680±0.1980)且差异具有统计学意义(P=0.0000);且表达水平随着肿瘤分期的增加而显著降低[III、IV期(0.4074±1945)明显低于I、II期水平(0.6927±0.4566)](P=0.0050);2.CCK-8法检测:转染mi R-150后的TPC-1细胞增殖能力显著低于空白对照组及空白载体组且差异具有统计学意义(P=0.0010),且对照组和空载组间差异无统计学意义(P>0.05);3.流式细胞仪检测结果示miR-150组细胞凋亡率[(14.79±1.85)%]显著高于对照组[(4.90±0.51)%]及空载组[(5.79±1.00)%]且差异具有统计学意义(P=0.0130),对照组和空载组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论mi R-150在PTC组织中呈低表达且表达水平与肿瘤分期相关;miR-150能抑制PTC细胞的增殖、促进其凋亡,在PTC的发生发展中起到抑癌基因的重要作用,这种作用可能是miR-150通过某种通路调控某种抑制基因的靶蛋白来实现的,具体机制有待于进一步的研究。