【摘 要】
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本研究的目的是构建亚洲Ⅰ型(AsiaⅠ)口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus，FMDV)VP1基因的重组犬Ⅱ型腺病毒，并对其表达蛋白的免疫原性进行检测，为重组活载体疫苗的研究奠定
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本研究的目的是构建亚洲Ⅰ型(AsiaⅠ)口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus，FMDV)VP1基因的重组犬Ⅱ型腺病毒，并对其表达蛋白的免疫原性进行检测，为重组活载体疫苗的研究奠定基础。
根椐测序结果，设计一对引物，利用PCR技术，从含有YN株亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒P1基因的pTeasy质粒中扩增出VP1基因，继而构建出真核表达载体PVAX-VP1。再将含有巨细胞启动子CMV的目的基因表达盒连接到穿梭载体pVAX△E3上，筛选出VP1表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子，获得转移载体。再经酶切、连接等方法获得重组腺病毒质粒。利用脂质体介导将重组质粒转染DK细胞，转染三次后，细胞出现明显的腺病毒病变。经PCR扩增、测序检测及基因组酶切鉴定，证明该病毒即为重组犬Ⅱ型腺病毒。命名为CAV2/FMDV。经验证，该重组毒可稳定遗传，其毒价为103.5TCID50/ml。经Western-blotting检验，证明该表达产物具有抗原活性。本实验成功构建了Asia-ⅠFMDVVP1基因的重组CAV2，并经实验证实其表达的目的蛋白具有免疫原性。为FMD活载体疫苗的研究奠定了基础。
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