吗啡精神依赖大鼠VTA和Hip脑区NCX1的表达变化及延胡索的干预作用

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目的:观察吗啡条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)和海马(Hip)中钠钙交换体亚型1(Na+-Ca2+exchanger1,NCX1)的表达变化,揭示NCX1在吗啡精神依赖中的作用;同时观察用延胡索中药治疗后,对吗啡大鼠CPP效应、以及VTA和Hip中NCX1表达变化的影响。  方法:(一)选用筛选合格的健康雄性SD大鼠40只,随机分成生理盐水(NS)对照组和吗啡模型组,每组20只。采用剂量递增法(吗啡起始剂量从d1的10mg·kg-1至d10的100 mg·kg-1)分别进行颈背部皮下注射NS和吗啡,每次注射20min后置黑、白箱中进行训练(白箱为吗啡伴药箱),连续注射10d。在末次训练48h后进行CPP测试,确认大鼠吗啡CPP模型建立成功,立即将两组大鼠处死,取VTA和Hip脑区,分别采用PCR和Western blot技术检测其NCX1的表达变化。  (二)选用筛选合格的健康雄性SD大鼠60只,随机分成6组:NS对照、模型、NS治疗、延胡索2 g·kg-1、1 g·kg-1、0.5 g·kg-1剂量治疗组,每组20只,建立吗啡CPP模型同方法(1)。在确认吗啡CPP模型建立成功后,NS对照组和模型组大鼠被立即处死并取材;剩余4组大鼠除NS治疗组灌胃用NS外,其它延胡索高、中、低剂量组大鼠则分别给予延胡索2 g·kg-1、1 g·kg-1、0.5 g·kg-1水提液进行灌胃治疗,持续治疗6d再次检测CPP后次日处死并取材,取材均同方法(1)。同样采用PCR和Western blot技术检测其VTA和Hip脑区中NCX1的表达。  结果:(一)在末次训练48h后,经过CPP测试,模型组与NS对照组比较,大鼠在白箱中停留时间明显延长(P<0.01);模型组训练前后比较,训练后在白箱中停留的时间明显延长(P<0.01)。模型组与NS对照组比较,大鼠VTA中NCX1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05或P<0.01);模型组与NS对照组比较,大鼠Hip内NCX1的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05或P<0.01)。  (二)在末次训练48h后,经过CPP测试,与NS对照组比较,模型、NS治疗、延胡索高、中、低剂量治疗5个组大鼠在白箱中停留时间明显增加(均P<0.01);经不同浓度的延胡索水提液治疗6d后,与NS治疗组比较,延胡索2 g·kg-1和1 g·kg-1组大鼠在白箱的停留时间减少(均P<0.01)。而且,模型组和NS对照组VTA和Hip的NCX1蛋白表达结果趋势同结果(一);同时,与NS治疗组比较,延胡索2g·kg-1和1g·kg-1组大鼠VTA中NCX1蛋白含量明显升高(P<0.05或P<0.01),而Hip中 NCX1蛋白含量明显降低(P<0.05或P<0.01),接近NS对照组。  结论:(1)NCX1mRNA和蛋白在吗啡精神依赖大鼠VTA脑区表达下调,在Hip脑区表达增高,这可能在吗啡精神依赖形成中发挥有重要作用;  (2)延胡索通过逆转VTA和Hip脑区中NCX1蛋白的异常表达。
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