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目的:重型颅脑损伤患者表现为高死亡率与高致残率,继发性脑损伤被认为是患者病情加重的重要因素。当今对重型颅脑损伤治疗效果不满意。国内外大量研究证实炎性因子与继发性脑损伤密切关联。因此对炎性因子的研究成为热点。最近的研究认为脑损伤后,坏死神经组织产生的炎性反应,如促炎细胞因子的增多、氧化应激反应产生的大量自由基对脑组织产生毒性作用,促使神经细胞的凋亡,并在继发性脑组织损害和功能修复中占据重要的位置。多数学者认为炎性因子的过度表达是加重脑继发损害的重要因素。有部分学者认为炎性因子在脑损伤后参与了脑保护作用,或具有双重作用。目前对炎性因子的具体作用与机理认识尚存在分歧,对脑损伤后的抗炎治疗存在争议。有必要对此进行进一步研究。炎性因子TNF-α,IL-1β,IL-6在脑损伤后的过度表达被认为是加重脑继发损伤的重要原因。目前对脑损伤后炎性因子的研究,主要集中于对脑脊液,血浆检测。其是否反映了脑组织中的炎性因子变化值得质疑。本实验拟通过免疫组织化学的方法对SD大鼠重型脑损伤后脑内炎性因子TNF-α,IL-1β,IL-6进行检测。明确重型颅脑损伤后是否存在炎性因子过度表达;正常脑组织及交界区脑组织是否存在广泛表达。并得出炎性因子在重型颅脑损伤后的表达规律,探讨其相互作用关系,并为临床提供可行的重型脑损伤治疗方法。材料与方法:SD大鼠70只,体质量250～300g,由河北医科大学动物中心提供。按随机原则分为A、B、C、D、E、F、G7组,每组10只。用10%水合氯醛腹腔注射(3ml/kg体重),麻醉生效后,将大鼠顶枕部鼠毛剪去。常规消毒后顶枕部中线切开头皮,长4cm,钝性剥开软组织、骨膜,暴露颅骨。在人字缝前3mm,颅骨中线旁3mm,钻直径5mm的圆形骨窗,保持硬膜完好无损。采用自由落体打击装置,以30g重锤从35cm高处打击,造成重型脑损伤,记录打击时间,缝合头皮饲养。G组动物只行开颅手术,不做脑挫伤作为对照。对A、B、C、D、E、F组实验动物分别于手术后24h、72h、120h、1w、2w、3w时间点取标本。深麻醉致死后,立即开胸自左心尖插管自升主动脉,以含4%多聚甲醛的0.1MPB(PH7.4)灌注后快速剥取脑组织,留取临近挫伤灶后方(临界区)及对侧相应部位(未损区)大脑为实验标本。对照组在相应部位进行取材作为正常对照。4%多聚甲醛固定24小时以上,制蜡块,石蜡切片厚约5微米。应用免疫组织化学染色SP法检测TNF-α,IL-1β,IL-6蛋白质在全部标本中的表达。通过测定阳性反应物的灰度,对免疫组织化学染色阳性反应物进行定量检测。应用SPSS11.5统计软件包,对免疫组织化学结果以x±s表示,用完全随机设计的单因数方差分析,SNK-q检验对结果进行分析。检验标准采用p<0.05统计学意义。结果:免疫组织化学染色结果:TNF-α着色于胞浆中,各实验组标本中都有表达,对照组标本中偶见表达,有统计学差别(P<0.01)。B、C组表达最明显,且二者表达无统计学差别(P>0.05)。C组,损伤侧(临界区)与对侧相应部位(未损区)表达广泛,无统计学差别(P>0.05)。A、D、E、F组,临界区比未损区表达明显,有统计学差别(P<0.05)。IL-1β着色于胞浆中,各实验组标本中都有表达,对照组标本中未见表达,有统计学差别(P<0.01)。C组表达最明显。IL-6着色于胞浆中,各实验组标本中损伤侧(临界区)都有表达,G组标本中未见表达,有统计学差别(P<0.01)。D组表达最明显。对侧相应部位(未损区)D、E、F有较明显表达。A、B、C组对侧相应部位(未损区)有少量表达,无统计学差别(P>0.05)。结论:1.TNF-α在创伤早期就有表达,第3,5天最高,且无统计学差别(P>0.05),第2,3周仍明显高于正常。故重型颅脑损伤后存在炎性因子TNF-α的过度表达。第3周高于第2周(P<0.05),考虑在重型颅脑损伤后的恢复期,TNF-α参与了脑损伤的修复过程。2. IL-1β在重型颅脑损伤后,脑组织广泛表达(损伤侧与对侧相应部位),与对照相比,长时间表达。故重型颅脑损伤后存在炎性因子IL-1β的过度表达。IL-1β在创伤后5天达最高,第2,3周也表达明显。考虑在重型颅脑损伤后的恢复期,IL-1β也可能参与了脑损伤的修复过程。由于第1天有表达增强,本实验不能表明TNF-α能诱导IL-1β的表达。3. IL-6在创伤1周后表达最高,第2,3周也表达明显,表达高峰晚于TNF-α,IL-1β表达高峰时间,TNF-α,IL-1β可能诱导了IL-6的表达。在创伤一周内,脑组织双侧表达差异显著,IL-6不存在广泛过度表达,有可能主要参与了脑损伤后的修复。4. TNF-α,IL-1β表达高峰在3-5天,与临床上脑水肿高峰期相符合,与脑脊液检测结果相近,故脑脊液检测TNF-α,IL-1β水平可作为间接反映颅内炎症指标,为临床提供参考。5.由于三周时三种因子继续高表达,故有可能共同参与了脑损伤后的修复。