【摘 要】
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越来越多的研究结果表明脂肪组织不仅仅是被动的能量储存器官,而且是能够分泌多种激素类物质的内分泌器官;脂肪细胞分化及其调控失常与人类多种疾病如肥胖症、糖尿病、脂肪肝
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越来越多的研究结果表明脂肪组织不仅仅是被动的能量储存器官,而且是能够分泌多种激素类物质的内分泌器官;脂肪细胞分化及其调控失常与人类多种疾病如肥胖症、糖尿病、脂肪肝、高脂血症及乳腺癌等密切相关。对脂肪细胞分化机制及其调控的研究,不但对于探讨上述重大生命和疾病过程具有重要理论意义,而且对于上述疾病的预防与治疗,特别是对于在细胞和分子水平上筛选针对上述疾病的药物,也具有实际意义。
Wnt信号通路控制多种细胞的命运,参与细胞的增殖、分化、凋亡等基本过程,维持细胞动态平衡。近些年来的研究表明,Wnt信号通路在前体脂肪细胞的增殖分化中发挥着重要作用。Wnt蛋白的配基通过与细胞膜上的特异性受体Frizzld1/2/5及辅助受体LRP5/6结合,激活经典或非经典的Wnt信号通路,影响下游靶基因产物的磷酸化作用,进而抑制C/EBPα、PPARγ等脂肪细胞关键转录因子,使细胞保持未分化状态,从而抑制脂肪的形成。
本论文旨在阐明Pygopus2蛋白是通过促进经典的Wnt信号通路从而抑制脂肪分化的。
在本课题中,我们应用一系列分子生物学和生物化学实验研究Pygopus2在脂肪分化过程中的作用。在体外,我们利用western和半定量PCR的方法,发现在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中Pygopus2的表达逐渐减少。在3T3-L1前脂肪细胞中过表达Pygopus2,发现其可以抑制前脂肪细胞的分化,相反,在3T3-L1前脂肪细胞中敲减Pygopus2可以促进前脂肪细胞的分化。通过荧光素酶报告基因实验发现Pygopus2的过量表达会在3T3-L1前脂肪细胞中激活经典的Wnt信号通路。在体内,我们通过半定量PCR的方法比较了Pygopus2在分离脂肪组织中的间质血管祖细胞(SVF)和脂肪细胞中的表达,发现其在SVF中有高表达,通过MEFs的实验证明了Pygopus2在胚胎发育过程中对脂肪形成的重要作用。
总之,我们的实验证明了Pygopus2是通过激活经典的Wnt信号通路来抑制脂肪形成的。
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