论文部分内容阅读
目的：研究黄芪总皂苷的主要有效成分黄芪甲苷和三七总皂苷的主要有效成分人参皂苷Rbl、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1及其配伍对小鼠脑缺血再灌注后氧化应激的影响,并从Nrf2/HO-1研究其作用机制。方法：由前期工作得到黄芪甲苷40mg/kg.人参皂苷Rg150mg/kg.人参皂苷Rb140mg/kg及三七皂苷R110mg/kg配伍后,小鼠脑缺血20min再灌注1h(早期)和24h后取脑组织匀浆,测定脑组织MDA、NO、GSH、SOD、T-AOC等氧化应激指标。取再灌注24h脑组织,对脑组织CA1区行HE染色,测定神经细胞存活率及脑细胞胞核、胞浆Nrf2和总蛋白HO-1蛋白含量。结果：脑缺血再灌注lh后,脑组织T-AOC活力,SOD活性和GSH含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,黄芪甲苷、Rg1、四种有效成分配伍、黄芪甲苷+Rg1、黄芪甲苷+Rb1组脑组织GSH含量均显著升高(P<0.05或P<0.01)；Rg1、R1、四种有效成分配伍、黄芪甲苷+Rg1、黄芪甲苷+Rb1、黄芪甲苷+R1组脑组织T-AOC活力均有显著升高(P<0.05或P<0.01)；四种有效成分配伍组与Rg1、Rbl和R1组比较,脑组织SOD活性增加更显著(P<0.05或P<0.01)；四种有效成分配伍组与黄芪甲苷、Rbl组比较,脑组织T-AOC活力显著增加(P<0.05或P<0.01)；四种有效成分配伍组与黄芪甲苷、Rg1、Rbl、R1和黄芪甲苷+R1组比较,脑组织GSH含量增加显著(P<0.01)。脑缺血再灌注24h后,脑组织MDA、NO含量显著升高(均P<0.01),SOD活性和GSH含量显著降低(P<0.01或P<0.05)。和模型组比较,黄芪甲苷组MDA、NO含量降低(均P<0.01),SOD活性和GSH水平无显著性变化(P>0.05)；人参皂苷Rg1可显著减少NO含量(P<0.01),对MDA、SOD和GSH均无影响(P>0.05)；人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对MDA、NO、SOD、GSH均无显著影响(P>0.05)。黄芪甲苷与三七的三个有效成分分别配伍(两种有效成分配伍)均能显著减少MDA和NO含量(P<0.01或P<0.05),且黄芪甲苷与人参皂苷Rbl、三七皂苷R1组合的效应大于人参皂苷Rb1单用和三七皂苷R1单用(P<0.01或P<0.05)；而两种有效成分配伍对SOD和GSH均无影响(P>0.05)。四种有效成分配伍可显著减少MDA和NO含量,提高SOD活性和GSH水平(均P<0.01),且与绝大部分药物单用和两种有效成分配伍比较,效应更为显著(P<0.01或P<0.05)。黄芪甲苷、两种及四种有效成分配伍均可降低脑组织MDA含量,而三七的三个有效成分单用对MDA含量无显著影响。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、两种及四种有效成分配伍均可降低脑组织NO含量。四种有效成分单用、两种有效成分配伍对SOD活性和GSH含量均无显著影响,而四种有效成分配伍可显著增加脑缺血再灌注后SOD活性和GSH含量。黄芪的主要有效成分黄芪甲苷和三七的主要有效成分人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1均可抑制海马CA1区神经细胞存活率的降低,且四种有效成分配伍及黄芪甲苷与三七总皂苷的有效成分配伍,其抑制神经细胞存活率降低的作用强于单个有效成分的效应。Western-bloting勺结果显示脑缺血再灌注24h后,脑组织Nrf2核转位和HO-1含量显著增加,四种有效成分配伍、黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷十三七皂苷R1均可促进脑组织Nrf2核转位和HO-1表达,且四种有效成分配伍、黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷+三七皂苷R1的Nrf2核转位率和HO-1表达增加作用均高于四种有效成分的单用,表明脑缺血再灌注后,为适应缺血缺氧等应激刺激,脑组织Nrf2/HO-1途径激活,Nrf2核转位及HO-1表达增加,从而对抗缺血缺氧导致的脑组织损伤,这是机体产生的保护性反应。四种有效成分配伍可增强Nrf2/HO-1信号途径的激活,从而对抗脑缺血再灌注后脑组织损伤。结论：黄芪和三七中的主要有效成分及其配伍可抑制脑缺血再灌注后氧自由基的生成,抑制脂质过氧化损伤,对脑缺血再灌注后脑组织具有一定的保护作用,且四种有效成分配伍对脑组织的保护作用增强。其作用机制可能与其通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化基因HO-1等的表达有关。