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HLA(human leukocyte antigen)系统是人类多态性最为丰富的遗传系统。截至到2014年3月，IMGT/HLA数据库报道HLA-A等位基因2579个、HLA-B等位基因3285个、HLA-C等位基因2133个。 CTL(cytotoxic T cells，CTL)细胞和NK(natural cell，NK)细胞是肝脏中重要的两类免疫细胞，它们均通过与HLAⅠ类分子相互作用调节机体的免疫功能。CTL细胞通过其表面受体分子TCR识别靶细胞表面的经典HLAⅠ类分子提呈的抗原肽启动细胞毒作用。NK细胞通过其表面一系列抑制性或活化性受体KIR(killer cell immunoglobulin-likereceptor，KIR)分子与HLAⅠ类分子相互作用来调节免疫活性。在生理条件下，抑制性作用信号占主导;当肿瘤发生时，肿瘤细胞表面HLAⅠ类分子表达发生变化，活化信号占主导，使NK细胞活化进而发挥免疫杀伤作用（“missing self理论”）。 肝癌细胞的存活需要同时逃逸CTL和NK细胞的双重杀伤。因此，我们推测肝癌细胞可能通过选择性调节经典HLAⅠ类分子等位基因的表达逃逸机体的免疫杀伤。 为验证该推测，以南京地区原发性肝癌及癌旁标本作为研究对象，首先对HLA基因和KIR基因进行分型，同时针对人群中分布频率大于3％的HLA-B等位基因进行等位基因特异性定量PCR引物的设计与验证，然后利用real time PCR对原发性肝癌/癌旁样本进行HLA-B等位基因mRNA表达的检测。利用HLA-G分子特异性引物与抗体分别在mRNA水平与蛋白水平检测HLA-G分子的表达，并结合KIR分型结果初步探讨HLA-B等位基因和HLA-G分子的表达与肝癌细胞免疫逃逸之间的相关性。研究结果如下: 1.利用PCR-SBT完成HLA-A、B、C基因分型的样本例数分别为38例、39例、31例，另完成6例细胞系（293T、NK92、BR、HepG2、THP、KB）HLA-A、B、C基因分型以用作阳参;利用PCR-SSP完成39例样本的KIR基因分型，并根据个体KIR基因不同将KIR基因型分为KIR-AA和KIR-BX。抑制性KIR3DL1分子和活化性KIR3DS1分子的分布频率分别为97.4％和43.6％，KIR2DL4分子为框架基因，分布频率为100％。 2.完成人群中分布频率大于3％的HLA-B等位基因特异性定量PCR引物的设计与验证，共设计43对HLA-B等位基因特异性定量PCR引物，经验证后有21对引物符合实验要求，可以用于等位基因表达的定量分析。 3.完成39例样本癌和癌旁组织各78个HLA-B等位基因mRNA定量表达的检测，并根据HLA-B等位基因外显子2编码序列的第80-83位氨基酸将其分为HLA-Bw4和HLA-Bw6。结果显示:HLA-Bw4分子表达不变和表达上调的比例为74.19％，而HLA-Bw6分子表达不变和表达下调的比例为76.60％;结合KIR分型结果分析:在KIR3DS1+的个体中，HLA-Bw4分子表达下调的比例(46.67％)明显高于KIR3DS1-的个体(6.25％)，并具有统计学差异(P=0.01)。 4.完成39例样本HLA-G分子表达的检测:肝癌组织中表达HLA-G1亚型，表达比例(33.33％)明显高于癌旁组织(7.69％)，具有统计学差异(P=0.005)。结合KIR基因分型结果分析发现，KIR-BX基因型个体HLA-G1阳性表达的比例(50％)明显高于KIR-AA基因型的个体(7.69％)，并具有统计学差异(P=0.009)。 根据以上结果推测:肝癌细胞可能选择性调节HLA-B等位基因及HLA-G分子的表达参与免疫逃逸。该免疫逃逸机制是根据目前实验结果的推测，由于目前样本量较少、患者性别、发病年龄、发病原因、肝癌分期等因素不同，需要增大样本量并结合病历资料分析验证。 我们构建的HLA-B等位基因特异性定量PCR引物设计方法及设计完成的引物可特异性的区分不同的HLA-B等位基因，可解决经典HLAⅠ类分子之间的高度多态性与相似性带来的无法特异性区分HLA-B各等位基因的问题。