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黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是已知真菌毒素中毒性最大的,具有强烈的致癌性、致突变性和遗传毒性,当人类或动物摄取AFB1超过一定剂量时会引起肝脏病变。农作物在生长、运输和存贮过程中易受到AFB1等真菌毒素的污染,因此引起人们广泛的关注。而近年来决明子等药食同源的种子类作物受AFB1污染的情况也日益得到重视。本文建立了胶体金和荧光微球两种免疫层析方法,分别定性和定量检测决明子中的AFB1。首先,本文利用超高效液相色谱法(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)筛选AFB1阴性样本,作为决明子中AFB1免疫层析检测方法的基质。按本文所使用的色谱条件,从本地购买的四份决明子样本中筛到三份AFB1阴性的样本。另一份阳性样本中AFB1的含量为0.129μg/kg。然后,本文分别优化了胶体金免疫层析法及荧光微球免疫层析法的标记pH值、抗体标记量以及T线上检测抗原(AFB1-BSA)的浓度。选取了有效的前处理方法。本文所构建的胶体金免疫层析法,采用T、C线比色定性检测,无需仪器判读,快捷方便,适合大批量决明子样本的初筛。该方法的裸眼检测限为0.4μg/L,实际样本的检测灵敏度为5μg/kg。本文还构建了灵敏度更高的荧光微球免疫层析法,采用荧光微球免疫层析读数仪读取T/C值,建立了决明子基质中竞争抑制曲线,进行定量检测。本方法的灵敏度为0.034μg/L,采用分段标曲,在0.1~0.6μg/L的范围内线性方程为y=-0.5854 log(x)+0.09948(R~2=0.9846),适合较低浓度样本的检测;在0.6~2.0μg/L的范围内线性方程为y=-0.2234 log(x)+0.1654(R~2=0.9888),适合较高浓度样本的检测。荧光微球免疫层析法与UPLC方法检测结果有很好的一致性,适合决明子中AFB1的定量检测。胶体金免疫层析法对决明子样本进行初筛,对于判定为阳性的样本,用荧光微球免疫层析法进行定量检测。这两种免疫层析检测方法配合使用,满足现场大批量样本筛查的需要。为了进一步验证本研究所建立的胶体金免疫层析法及荧光微球免疫层析法,本研究对两种免疫层析试纸条的特异性、稳定性、精密度、假阴性率和假阳性率进行了评价。实验结果显示,两种免疫层析试纸条均有很好的特异性和稳定性,批间差和批内差均小于15%,假阴性率均为0,假阳性率均不大于5%。