微接触印刷法制备胶原蛋白浓度梯度及其对内皮细胞粘附与迁移的研究

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为将不同浓度蛋白经单一步骤转印至同一个基材表面,我们尝试在传统微接触印刷技术上进行改进。本文采用利用微接触印刷技术在同一模板上印刷四种浓度胶原(50、100、200、300μg/ml),实现了在同一基材表面制备含有不同蛋白浓度的模板材料。扫描电子显微镜分析表明:PDMS印章表面平整,图形完整。激光共聚焦显微镜观察不同浓度FITC-胶原蛋白(50、100、200、300μg/ml)在基材表面吸附情况。采用荧光分析软件分析了基材表面蛋白域荧光强度与蛋白浓度的相关性。白蛋白用来封闭蛋白未粘附域,封闭后模板材料表面接种人脐静脉内皮细胞,探讨不同浓度胶原蛋白构建的生物材料对内皮细胞粘附与迁移的影响。以MTT法考察不用浓度胶原对人脐带内皮细胞在6、24、48、72 h内的增殖能力影响。激光共聚焦显微镜检测初始粘附期细胞骨架铺展状况;单个细胞轨迹测量法测量内皮细胞培养24 h后的迁移速率和净位移。实验结果表明:模板材料表面蛋白域完整,蛋白域内荧光强度均匀,50、100、200、300μg/ml4种浓度FITC-胶原蛋白在基材表面吸附的荧光强度逐步增加,分别:38.51±1.63、55.21±3.88、73.17±3.59、80.59±1.12。不同浓度蛋白域内皮细胞骨架铺展比空白组铺展充分。各浓度组内皮细胞增殖能力和净位移均强于空白组(P<0.05),随着浓度的增加(50μg/ml至300μg/ml),内皮细胞增殖能力和净位移增强(P<0.05)。除300μg/m浓度组外各浓度组迁移速率均小于对照组(P<0.05)。然而,各浓度组间随浓度增加,内皮细胞的迁移速率增大(P<0.05)。   综上,利用微接触印刷技术在同一基材表面可以获得不同蛋白浓度域,用于内皮细胞粘附与迁移平衡调控,为细胞化学趋向性研究提供了有益的信息。
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