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研究发现青蒿素(ART)在抗禽类疟疾、球虫等原虫病有较好的效果,但其药物代谢动力学规律尚不明确。在此基础上,本试验重点考察了 ART在鸡体的安全性、药代动力学特点及其潜在机制,为临床合理应用提供参考。首先,将30日龄绿壳蛋鸡分为空白组、ART溶剂对照组和ART低、中、高(15、40、100mg/kg)剂量组(n=6),分别按剂量换算口服给药,连续给药11次,每次间隔12h,观察鸡的精神状态和生长状况,通过肝脏指数、增重率、血清生化指标、组织外观和显微结构来判定ART对机体的潜在副作用。结果发现,各组试验鸡生长状况良好,精神正常;剖检观察心、肝、脾、肾、脑等各个组织器官无明显异常;各给药组的肝脏指数和增重率与空白组相比无明显差异(P>0.05),血清生化指标也均正常;显微结构观察发现肝、肾、脑结构与空白组没有显著差异。这说明常规剂量的ART对于鸡的安全性较高。其次,为研究ART在鸡体内的药代动力学特点,我们建立了液相色谱串联三重四级杆质谱检测鸡血浆中ART的方法:即以电喷雾电离源(ESI)作为离子源,以蒿甲醚(ARM)做内标(IS),以ART和ARM的[M+Na]+准离子峰做二级质谱扫描,选择m/z 305.2→151.3(ART)、m/z 321.0→163.1(ARM)两对离子以多监测反应方式(MRM)进行定量分析。ART在10-1000 ng/mL范围内线性关系良好(R2=0.997),最低检测限为10 ng/mL,回收率在90%-105%之间,日间、日内精密度(RSD)均小于15%。本方法操作简单、灵敏、重现性好,可用于鸡血浆中ART的检测。按照15、40、100 mg/kg三个剂量以及口服次数不同(1、3、7、11)将试验鸡分成12个组(n=6),各组分别灌胃给药,每组分别在最后一次给药结束后 10 min、30 min、1h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h、4 h、6 h、8 h 分别采集300μL血液加入抗凝管中待测。经检测发现,上述3个剂量在口服1次后,ART在鸡血浆中的达峰时间分别为1h、1.5 h、1.5 h;口服3-7次后,达峰时间均维持在1h左右;口服11次后,15 mg/kg剂量组的达峰时间提前至0.5 h,40-100 mg/kg的峰值则出现在0.167 h。低剂量(15 mg/kg)ART在口服不同次数间的药代参数无明显变化;而中高剂量(40、100 mg/kg)连续口服11次与口服次数少的相比,口服清除率显著升高,药时曲线下面积和血药浓度等参数则显著降低。这提示ART在鸡体内存在明显的自身诱导代谢现象,并呈剂量依赖性。随后,本实验设立空白组、溶剂对照组、ART组(100 mg/kg)连续口服11次(每次间隔12 h)通过肝微粒体体外孵育和荧光定量PCR(qPCR)探究ART在鸡体内诱导代谢的机制。提取肝微粒体后进行蛋白浓度和肝微粒体活性测定,结果表明ART组的蛋白含量以及CYP1A和CYP3A酶活性高于空白组,但无明显差异(P>0.05)。肝脏组织内CYP相关基因的qPCR检测发现,CYPIA4、CYP3A37的相对表达量上调了6-7倍左右(P<0.05),CYP2C23a上调了10倍左右(P<0.05),CYP2C45上调了70倍左右(P<0.01);CYP2C23a和CYP2C45的转录调控因子鸡异生素受体基因(CXR)的表达水平无显著变化。此外,肝脏内主动转运系统中的多重耐药性1基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白2基因(MPR2)的表达水平也无明显变化。这说明ART在鸡体内的自身诱导代谢主要是通过诱导CYP450酶超家族(CYP1A4、CYP2C23a、CYP2C45、CYP3A37)完成的,其中发挥主要代谢作用的可能是以CYP2C亚家族的CYP2C45为主,而CYP1A、CYP3A亚家族发挥辅助作用。最后,我们探究了 ART对CYP2C23a和CYP2C45基因表达水平时效性的影响。将试验鸡分为9个组(n=9),按照不同剂量(15、40、100mg/kg)分别口服Id、3d、5d。每组分别在最后一次给药结束2 h、4 h、8 h处死实验动物,采集肝脏用qPCR检测CYP2C23a、CYP2C45的相对表达量。结果表明:不同剂量组肝脏的CYP23a和CYP2C45的相对表达量通常在给药4 h内达到峰值,其中CYP2C45在中、高剂量下初期给药时就显示出较高的表达量,随着给药时间的延长,低剂量组CYP2C45的表达量也会提高。不同剂量在连续多次给药后均会不同程度地诱导CYP2C45的高表达。CYP2C23a的表达也具有剂量和时间增加而提高,但提高倍数有限,这说明ART在鸡体内的代谢中CYP2C45占主导地位。