【摘 要】
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背景:水稻是世界上最重要的粮食作物之一,同时也是基础研究的模式植物之一。核糖核酸酶(Ribonucleases,RNase,RNS)普遍存在于各种生物中,其保守性提示了功能的重要性。盐胁迫造成的
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背景:水稻是世界上最重要的粮食作物之一,同时也是基础研究的模式植物之一。核糖核酸酶(Ribonucleases,RNase,RNS)普遍存在于各种生物中,其保守性提示了功能的重要性。盐胁迫造成的影响几乎涉及所有的生理和生化过程,严重时导致水稻不能正常生长、减产甚至绝收。对抗盐逆境分子机理的研究对水稻生产具有重要的意义。已有研究表明,水稻RNS家族成员在生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。
研究目的:制备针对水稻RNS基因编码的蛋白质的特异性抗体,了解水稻RNS基因编码蛋白质在叶片不同发育时期以及盐胁迫下的表达模式,为其功能的研究提供线索及依据。
材料与方法:对候选基因编码的蛋白质进行抗原决定簇的预测,选出抗原决定簇峰值较高的片段后,合成多肽偶联后免疫新西兰大白兔进行多克隆抗体的制备。用Western blotting检测RNS蛋白质在水稻品种93-11的苗期1 cm、2 cm、5cm、10 cm、15 cm、分蘖期、孕穗期、开花期和成熟期叶片中的表达,同时检测RNS蛋白质在水稻品种93-11盐处理后不同时间点的表达变化,并与水稻MPSS数据库中叶片苗期的转录信息进行比较分析。
结果:通过Western blotting技术检测到OsRNS1-OsRNS7蛋白质在叶片中有表达,其中OsRNS4主要在苗期表达,揭示其在苗期发挥作用,其它蛋白质则主要在成熟期表达,但未检测到OsRNS8的表达;水稻OsRNS4在盐胁迫条件下表达上调,其它RNS蛋白质大都随盐胁迫时间的延长而下降。将水稻RNS蛋白质的表达与转录信息进行比较,发现二者在部分基因中有一定的相关性。
结论:通过对OsRNS在叶片生长过程中的表达分析,发现在苗期特异性表达的蛋白质OsRNS4,主要在苗期表达,成熟期后未检测到表达,说明它有可能参与到水稻苗期的某些生命活动中。其他蛋白质主要在成熟期叶片中表达,苗期表达较低。本实验还研究了RNS蛋白质在水稻品种93-11盐胁迫过程中的表达情况,发现OsRNS4蛋白质随着盐胁迫时间的延长表达量呈现逐渐上升的趋势,揭示其在盐胁迫应答过程中可能具有独特的功能。OsRNS1蛋白质在盐处理后4h的表达有所上调,但随后表达下降。OsRNS2、OsRNS5、 OsRNS6、 OsRNS7的表达在盐处理最初几天内表达上调,但随后下降。本实验为揭示RNS蛋白质在水稻正常生长及盐胁迫过程中的功能提供了有价值的依据。
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