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增生性瘢痕（Hypertrophic scar,HS）属于病理性瘢痕的一种,是创伤异常修复的结果,在HS发展过程中,包括以成纤维细胞为主的多种细胞活性异常增强,细胞过度增殖,从而导致真皮组织过度增生而引发HS。近年来,关于HS的研究被国内外众多学者所关注,但由于其发病机制繁杂,同时缺乏较好的动物模型,因此,HS的发病机制仍未完全明确,也缺乏确有疗效的治疗方法。大量的研究报道证实,CO2点阵激光对HS有较好疗效,但其具体的作用机制仍不明晰,从而限制该项技术在临床的进一步推广应用。相关研究表明,HS的形成过程中GLI-1蛋白表达增多,提示Hedgehog信号通路处于激活状态,而当Hedgehog信号通路受到抑制,HS组织内的α-SMA、胶原蛋白、血管内皮生长因子（VEGF）表达降低,HS的发展受到抑制,这提示阻断Hedgehog信号通路可能抑制HS的发生和发展。近年,C57BL/6J小鼠被学者们应用于HS模型的建立及相关的发病机制及防治研究工作。有报道指出,经皮下注射一定剂量的博莱霉素（Bleomycin,BLM）后,小鼠皮肤呈现纤维化特征,类似于人类的HS病理改变。本研究利用BLM干预小鼠形成HS的方法,检测HS发生过程中的一些重要指标,探讨HS发生的机制,并利用CO2点阵激光对HS进行治疗,探讨CO2点阵激光治疗HS的相关机制,进而为该技术在临床的进一步推广提供有价值的参考.目的通过BLM干预C57BL/6J雄性小鼠建立的HS模型,分析Hedgehog信号通路在病变过程中的表达情况;采用CO2点阵激光治疗HS,探讨其对Hedgehog信号通路的影响。方法1、84只6周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为A、B、C、D四组,每组21只,其中:A组为空白对照组,实验期间,以皮下注射给药的方式,每天注射一次PBS,剂量为100μl,持续至实验结束;B、C、D组浓度分别为0.5mg/mL、1mg/mL、3mg/mL BLM（博莱霉素）诱导实验组,每次皮下注射100μl,每天给药一次。2、持续给药至第3周、第4周、第5周随机处死7只小鼠取材,取材后固定、包埋、切片,行HE、Masson’s染色后,于显微镜下观察皮肤组织中成纤维细胞分布、血管分布情况,胶原纤维形态、排列情况,分析皮肤纤维化程度,观察小鼠皮肤瘢痕组织病理形态学改变。3、免疫荧光染色后检测皮肤组织中GLI-1、α-SMA蛋白的表达情况,并以ImageJ软件测量各皮肤标本真皮厚度,探讨不同剂量的BLM对瘢痕诱导的效果,以及对Hedgehog信号通路的影响。4、49只C57BL/6J雄性小鼠均以1mg/mL的BLM皮下注射进行瘢痕模型的制作,4周后随机处死7只小鼠,行组织学染色以及免疫荧光染色,检测瘢痕模型是否成功,剩余小鼠随机分为A、B、C三组,A组不做处理继续饲养,B组以10mJ能量的激光进行治疗,C组以20mJ能量的CO2点阵激光治疗,分别于实验开展后（注射BLM开始）第6周、9周随机处死7只小鼠取材,进行组织学染色观察小鼠皮肤瘢痕组织病理形态学改变,以及免疫荧光染色观察小鼠皮肤瘢痕组织α-SMA及GLI-1表达。5、分析不同能量的CO2点阵激光对BLM建立的小鼠HS模型的治疗效果,并初步探讨CO2点阵激光治疗HS机制。结果1、组织学染色结果显示,A组对照组类似于正常皮肤,其胶原纤维排列规则,未见明显增粗,成纤维细胞有序排列,无炎性细胞浸润。实验组小鼠在第3周时候便出现类似于瘢痕组织的病理特征,第4周时瘢痕表现更甚,至第5周后未见明显改变,具体表现为:成纤维细胞紊乱明显,出现漩涡或结节状,同时胶原沉积,胶原纤维增粗,出现无序排列,有可见的炎性细胞浸润和毛细血管增生,皮下脂肪组织被结缔组织取代。其中,B组0.5mg/mL BLM诱导的小鼠纤维化较之其他两组不太明显,D组3 mg/mL BLM诱导的小鼠纤维化明显,有大量的炎性细胞浸润,但其胶原纤维增加不均一,甚至在脂肪层和肌肉层均出现了纤维化的真皮乳头,而C组1 mg/mL BLM诱导的小鼠纤维化同样明显,但较之D组而言,纤维增加的厚度均一。2、免疫荧光显示GLI-1蛋白随着BLM剂量增加以及时间的延长,表达量逐渐升高;经ImageJ软件测量后发现A组在第三、四、五周时真皮层厚度和正常皮肤接近,B组真皮厚度有所增加,但增加趋势较缓,D组真皮层厚度增加明显但不均一,而C组真皮层厚度增加明显且均一,且在第4周和第5周时厚度约为A组2倍左右。3、CO2激光治疗组中,A组（模型对照组）和B组（10mJ CO2激光治疗组）结果类似,而C组（20mJ CO2激光治疗组）皮肤瘢痕减少,纤维化程度减轻,真皮层胶原厚度降低且效果明显;此外,免疫荧光结果显示,C组经过CO2点阵激光治疗后,皮肤瘢痕组织中α-SMA、GLI-1表达明显降低。结论1、1mg/mL剂量组的小鼠4周后胶原纤维增加明显、均一,有大量的炎性细胞浸润,毛细血管增多,经测量真皮层厚度是正常皮肤2倍左右,且重复性高,可作为制作HS模型的可靠方法。2、正常小鼠GLI-1表达量低,提示Hedgehog信号通路未被激活,经BLM刺激后的小鼠GLI-1表达量较高,提示Hedgehog信号通路被激活。3、20mJ能量的CO2点阵激光对经BLM诱导的瘢痕具有抑制作用,可能的原因是该能量可以促进成纤维细胞的凋亡,并抑制Hedgehog信号通路有关;10mJ能量的CO2点阵激光对经BLM诱导的瘢痕无抑制作用,这可能是低能量的CO2点阵激光对皮肤的损伤不足以启动机体自我修复机制。