【摘 要】
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核盘菌引起的油菜菌核病是我国油菜上的一种重要病害，尤其在南方油菜产区发病严重，严重影响到油菜高产优质，造成巨大经济损失，居中国油菜三大病害之首。 多聚半乳糖醛酸酶及外
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核盘菌引起的油菜菌核病是我国油菜上的一种重要病害，尤其在南方油菜产区发病严重，严重影响到油菜高产优质，造成巨大经济损失，居中国油菜三大病害之首。
多聚半乳糖醛酸酶及外切多聚半乳糖醛酸酶等是核盘菌致病力发挥作用的关键酶。本文主要从基因工程角度出发，根据Genebank中提交的序列，用PCR方法克隆了核盘菌的多聚半乳糖醛酸酶基因PG5及外切多聚半乳糖醛酸酶基因EXPG2，再以扩增出的PG5及EXPG2基因片段作为模板设计引物扩增出一个相应的小片段。将两个同样的片段反向连接，插入到植物表达载体2300sn的35S启动子和nos终止子之间，分别构建了可转录表达出发夹RNA(hairpin RNA，hpRNA)结构的油菜RNA干扰载体2300PG及2300ex。
本研究同时构建了包含双向CaMV35S及nos启动子的双元RNAi载体，并有对应的nos及ocs终止子序列。在两个启动子之间通过XbaI和SalI位点插入核盘菌基因组DNA片段，从而得到一系列的RNAi载体。在双启动子载体中，CaMV35S和nos启动子相对排列，以YbaI和SalI位点间插入的靶序列为模板，分别转录出其正义和反义链，形成功能性siRNA。
通过农杆菌介导的转化，分别将目的RNAi结构单元导入甘蓝型油菜，通过卡那霉素筛选得到抗性植株。
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