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辣椒疫病(Phytophthoracaps/c/)是辣椒生产中的一种毁灭性病害,可引起大面积死秧,成为影响我国辣椒生产的主要障碍,因此,深入了解抗病基因的遗传效应以及利用分子标记技术开展辅助选择育种将具有重要的理论和实践意义。本试验以三个抗性亲本B072、B162、B4982和3个感病亲本B088、B104、B145为材料,通过杂交、自交和回交获得相应的P、F1、F2和B1四个世代材料,在苗期进行人工接种鉴定,分析辣椒疫病抗性的遗传规律;以回交代(B088×B072)×B088为材料,采用集团分离分析法(BulkedSegregantAnalysis,BSA),试图找到与辣椒疫病抗性基因相连锁的RAPD分子标记。获得的主要结果如下:
l、以抗病亲本为父本和感病亲本为母本进行杂交,所获得的辣椒F。代的疫病抗性表现为中间偏抗,病情指数介于中亲值和抗性亲本之间。
2、以对辣椒疫病表现高抗或免疫的B072作为父本时,在两个杂交组合B088×B072和B145×B072的F2代群体中,抗病个体与感病个体符合3:1分离比例,说明其抗病性是由单显性基因控制;在另外一个杂交组合B104×B072的F2代群体中,抗病个体与感病个体的分离比例为9:7,抗病性表现出受两对显性互补基因控制。以抗病亲本B162作为父本时,在杂交组合B145×B162的F2代群体中,抗病个体与感病个体的分离比例符合15:1,说明其抗病性是由两对独立显性基因控制;在另外两个杂交组合B088×B162和B104×B162的F2代群体中,抗病个体与感病个体的分离比例分别是13:3和55:9,抗病性表现分别受到两对重叠作用基因和三对基因的控制。说明辣椒疫病抗性受到遗传背景的影响,表现出抗性遗传的复杂性。
3、在回交组合中,当以高抗亲本B072作为轮回亲本进行回交时,三个回交后代(B088×B072)×B072、(B145×B072)×B072和(Bl04×B072)×B072的抗病与感病单株的分离比例均符合1:0,抗性明显趋向高抗亲本。在以感病亲本B088、B104和145作为轮回亲本进行回交时,在(B088×B072)×B088的群体中,抗病与感病单株的分离比例符合1:1的孟德尔分离规律,说明抗性受单显性基因控制;但在回交组合(B145×B072)×B145和(B104×B072)×B104的后代中,抗病与感病单株均不符合理论值的l:1和3:1的分离比例。
4、利用Operon公司生产的lObp寡聚核苷酸随机引物对(B088×B072)×B088构成的抗病和感病基因池进行RAPD扩增,共筛选了320个随机引物,筛选获得一个在抗病基因池和感病基因池之间表现多态性的随机引物OPH一05,扩增出特异DNA片段OPH一05~500。
5、用多态性随机引物OPH一05对构建抗病基因池和感病基因池的20个单株进行RAPD扩增,结果在组成抗病基因池的10个单株中全部扩增出特异DNA谱带OPH-051soo,在组成感病基因池的10个单株中均没有扩增出特异谱带,初步证明OPH一051~o。与抗病基因连锁。
6、以(B088×B072)×B088群体的180个单株DNA为模板进行RAPD扩增,并与苗期人工接种的鉴定结果相比较,计算出特异DNA谱带OPH-05,~o。与辣椒抗疫病基因的遗传距离为17.7cM。