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三重基序蛋白TRIM5α(Tripartite motif protein5 alpha)是哺乳动物细胞中一种重要的限制因子,广泛分布于各种哺乳动物细胞中。人类TRIM5α mRNA广泛表达于人类各个组织中,并且Ⅰ型干扰素IFN-α/β/γ均能与TRIM5α基因启动子的ISRE元件结合,上调TRIM5α mRNA的表达。恒河猴(Macaca mulatta)TRIM5α是恒河猴体内重要的限制因子。目前对恒河猴尤其是中国恒河猴TRIM5α的组织分布以及在受到外界刺激时TRIM5α mRNA表达量的变化研究还未见报道。本论文通过从中国恒河猴各组织中提取总RNA,以β-actin基因作为内参照,通过逆转录PCR检测各组织中TRIM5α mRNA的表达。我们选择用HIV-GFP-VSVG感染、用佛波脂(Phorbol myfismte acetate,PMA)+离子霉素(Ionomycin,Ion),CD28抗体+CD49d抗体分别共刺激恒河猴PBMC,研究不同刺激对中国恒河猴TRIM5αmRNA表达量的影响。研究发现:TRIM5α mRNA广泛表达于恒河猴各组织中,在免疫系统和泌尿生殖系统各组织,如腹淋巴结、睾丸和附睾中表达量最高,而在神经系统各组织如大脑、脊髓中表达量比较少,在其他各组织中未见明显的表达差异。此外HIV-GFP-VSVG感染、PMA+Ion与CD28抗体+CD49d抗体分别共刺激PBMC均能促进PBMC TRIM5α mRNA表达量的上调。
TRIM5α作为恒河猴体内的最主要的限制HIV-1感染的限制因子,除了可能通过促进HIV-1的脱壳和阻止整合前复合物PIC(pre-integration complex)入核,恒河猴TRIM5α还能限制HIV-1病毒颗粒的产生。在这个过程中B30.2结构域是非必需的,而B-box2和Coiled-Coil结构域起着决定性的作用。因为鹰猴(Aotestrivirgatus)TRIMCyp(omTRIMCyp)蛋白和北平顶猴(Macaca leouina)TRIMCyp(npmTRIMCyp)蛋白的B-box2和Coiled-Coil结构域与恒河猴TRIM5α的B-box2和Coiled-Coil具有很高的同源性,我们希望了解鹰猴TRIMCyp蛋白和北平顶猴TRIMCyp蛋白对HIV-1病毒颗粒的产生是否有限制作用。本论文主要通过将质粒pNL4.3分别与质粒pLPCX、pLPCX-npmTRIMCyp-HA、pLPCX-omTRIMCyp-HA和pLPCX-rhTRIM5α-HA共转染293T细胞,通过westernblot检测细胞内Gag蛋白和TRIM5蛋白的表达情况,研究omTRIMCyp蛋白和npmTRIMCyp蛋白对HIV-1病毒颗粒产生的限制作用。结果表明:北平顶猴TRIMCyp蛋白、鹰猴TRIMCyp蛋白都能不同程度的促进HIV-1病毒Gag蛋白的降解。