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研究背景和目的:
药物性肝病(Drug induced liver disease，DILD)是指由药物或/及其代谢产物引起的肝脏损害。随着药物的广泛应用、新药的不断涌现和联合用药的增多，药源性肝损害已成为国内外常见且较严重的药源性疾病。虽然我国药源性肝损害构成比低于国外，但是却在整个药物不良反应中占据10％～15％。由于药物性肝病临床表现多样化，目前尚缺乏特异性诊断指标，且容易被原发病掩盖或误诊，以致患者没有及时停药而导致爆发性肝衰竭等严重后果。临床上将急性药物性肝损伤分为3型(1)肝细胞损伤型；(2)胆汁淤积型；(3)混合型。而目前药物性肝病的确切发病机制尚不清楚。
COX—2(cycloxygenase—2)是环氧合酶的一个亚型，在正常情况下在大部分组织中不表达或极低表达，只有在细胞受到各种刺激的情况下才诱导表达，本实验将主要通过使用对乙酰氨基酚和氯丙嗪，分别复制急性肝细胞型肝损伤的动物模型和急性胆汁淤积肝损伤的动物模型，并使用选择性COX—2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)给大鼠灌胃。通过测定COX—2在肝组织中的表达状况，结合肝脏生化、肝脏病理的检查探讨COX—2在药物性肝病中的作用。
材料和方法:
1.肝损伤动物模型制备
1.1分组
60只SD大鼠(体重180-230g)，随机分为A、B、C、D、E、F六组，每组10只，A组为空白对照组，B组为对乙酰氨基酚组，C组为对乙酰氨基酚+西乐葆组，D组为氯丙嗪组，E组为氯丙嗪+西乐葆组，F组为西乐葆组。
1.2处理
60只SD大鼠饲养三天，分组后，B组大鼠给予3g/kg体重的对乙酰氨基酚溶液(用40℃生理盐水配制)灌胃；C组大鼠给予3g/kg体重的对乙酰氨基酚溶液(用40℃生理盐水配制)灌胃同时给予20mg/kg体重的西乐葆灌胃；D组大鼠给予75mg/kg体重的氯丙嗪腹腔内注射；E组大鼠给予75mg/kg体重的氯丙嗪腹腔内注射同时给予20mg/kg体重的西乐葆灌胃；F组大鼠给予20mg/kg体重的西乐葆灌胃；空白对照组大鼠自由进食、饮水。经上述处理后，各组大鼠继续饲养24h。
2.实验指标检测
2.1肝脏生化指标检测：
给药24h后采血，检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、直接胆红素(Dbil)、总胆红素(Tbil)、总胆汁酸(TBA)。计算R值。
2.2肝脏标本病理学观察及COX—2的检测
取血后取大鼠肝脏组织，制作石蜡切片，分别行HE染色观察病理改变及免疫组织化学染色检测COX—2表达情况。
3、实验数据处理
将所有数据输入EXCEL2003数据库，用SPSS11.5软件完成统计分析。正态分布的计量资料用均数±标准差(-x±s)表示，两组间比较采用t检验，多组间比较用方差分析，方差齐时两两比较用LSD—t检验，方差不齐用Games—Howell；计数资料的描述以率表示，组间比较采用X2检验或Fisher确切概率法检验；等级资料比较采用秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。
实验结果：
1.肝脏生化检测
①A组(空白对照组)与F组(西乐葆组)相比较，血清肝脏生化结果无明显变化；②B组(对乙酰氨基酚组)ALT、AST、Tbil、Dbil、ALP均较A组升高，其中ALT升高达3倍以上：③C组(对乙酰氨基酚+西乐葆组)ALT、AST、ALP、TBA均较B组升高；④D组(氯丙嗪组)ALT、AST、Tbil、Dbil、ALP、TBA均较A组升高，其中ALP、TBA增高超过2倍；⑤E组(氯丙嗪+西乐葆组)与D组比较，ALT、AST、TBA升高，有显著性差别。
2.R值计算
以A组的ALP、ALT平均数为正常值，计算出B组(对乙酰氨基酚组)RB=2.62±0.37，D组(氯丙嗪组)RD=1.77±0.25，RB的95％置信区间为(2.36，2.89)；RD的95％置信区间为(1.59，1.95)。
3.肝脏病理改变
A组(空白对照组)及F组(西乐葆组)大鼠肝组织完好，肝索呈放射状排列整齐，肝细胞形态正常；B组(对乙酰氨基酚组)，可见肝实质细胞点状坏死，个别可见灶性坏死，肝索排列紊乱，部分肝细胞肿胀，小叶内和汇管区有较多炎症细胞浸润；C组(对乙酰氨基酚+西乐葆组)病理改变与B组大致类似，但肝细胞水肿明显；D组(氯丙嗪组)偶见点状坏死，部分区域可见毛细胆管、肝细胞和枯否细胞内可有淤胆，肝窦增宽，汇管区可有炎症细胞浸润；E组(氯丙嗪+西乐葆组)肝脏病理改变与D组大致相似。
4.COX—2在药物性肝损伤中的表达
A组(空白对照组)及F组(西乐葆组)大鼠肝脏未见COX—2的阳性表达；COX—2在B组(对乙酰氨基酚组)及D组(氯丙嗪组)大鼠肝组织中表达均明显升高，使用COX—2抑制剂后可使COX—2表达减低，C组(对乙酰氨基酚+西乐葆组)与E组(氯丙嗪+西乐葆组)大鼠肝组织中COX—2表达分别较B组及D组明显减低；COX—2阳性表达呈黄—棕黄色，主要定位于细胞浆中。
结论：
1.本实验利用对乙酰氨基酚和氯丙嗪，成功复制了急性肝细胞型肝损伤动物模型和急性胆汁淤积型肝损伤动物模型。
2.COX—2在对乙酰氨基酚所致大鼠急性肝损伤肝组织中表达明显升高，选择性抑制COX—2后，肝损伤加重，提示COX—2表达增高可能是机体对抗对乙酰氨基酚所致的急性肝损伤的一种保护性机制。
3.COX—2在对氯丙嗪所致大鼠急性肝损伤肝组织中表达明显升高，选择性抑制COX—2后可加重肝损伤，提示COX—2表达增高可能足机体对抗氯丙嗪所致的急性肝损伤的一种保护性机制。