【摘 要】
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对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一种具有囊膜、无包涵体的杆状型双链环状DNA病毒,Nimaviridae属Whispovirus种中唯一的物种,也是严重危害对虾养殖业
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对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一种具有囊膜、无包涵体的杆状型双链环状DNA病毒,Nimaviridae属Whispovirus种中唯一的物种,也是严重危害对虾养殖业的最主要病原。目前我们的研究主要围绕WSSV的蛋白功能开展研究。这是因为病毒蛋白参与病毒的形态构成、对宿主细胞的入侵、增殖等一系列活动,并在其中扮演了重要角色。本论文研究分为以下两个部分:(1)质谱发现病毒膜蛋白VP32是ORF wsv198的编码产物。我们构建了融合表达载体pGEX-2Th-vp32和pMAL-vp32并分别在Ecoli BL-21菌株中表达纯化了GST-VP32和MBP-VP32,制备了相应的抗血清。通过western—blot分析进一步证实了VP32属于病毒膜蛋白。免疫金标定位显示其分布在病毒囊膜上,使用去污剂0.1%Tween-20轻微处理囊膜后,金标定位显示其似乎位于囊膜内侧。进一步对其蛋白质功能的研究(主要是蛋白质相互作用方面)遇到了阻力,推测是耦联的GST/MBP影响了VP32的正确折叠,无法形成天然空间构象。(2)WSSV ORF wsv 001编码产物类胶原蛋白(collagen-like protein,CLP)是WSSV病毒中一个非常独特的蛋白,由1684个氨基酸组成,预测分子量为168.2 KDa。经研究分析,该蛋白含有一段特异的类胶原蛋白序列(Gly-X-Y,161—1327 aa),在病毒中发现该序列,是极为罕见的。我们选取该蛋白的N端,中段,C端,分别在E.coli BL-21菌株中表达蛋白片段,并制备相应抗体,随后western—blot检测该病毒蛋白在病虾各组织中的分布,发现具有一定差异性,并且C端蛋白片段的杂交信号不明显,推测发生了降解或剪切。以上为进一步研究该蛋白的功能和其对于病毒复制,感染的意义打下了基础。
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