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猪圆环病毒(porcine circovirus)属于圆环病毒科(Circoviridae),其基因组为单股环状DNA,病毒粒子无囊膜,呈二十面体对称,是目前哺乳动物中已知的最小病毒之一。其中的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)等猪圆环病毒相关疾病(PCV related diseases,PCVRD)的病原体,该病毒具有传播广、危害大等特点,给世界养猪业造成严重经济损失。该病毒有两个最主要的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),它们的主要功能分别为编码复制蛋白和结构蛋白,并且两个主要开放阅读框的间隔区域有着重复序列,圆环病毒属的病毒基因组有茎环结构序列,参与滚环复制。本研究通过对来自湖南益阳某猪场同一头患病猪的不同组织器官(淋巴结、脾脏、肺脏)提取总DNA,PCR扩增PCV2的全基因组后进行DNA克隆,从中随机挑选了69个克隆(淋巴结、脾脏、肺脏分别23个)。通过对这69个克隆进行酶切验证及测序,并将测序结果整理后进行在线Blast比对,若为未报道过的序列则上传至NCBI数据库。经在线多重序列比对及绘制进化树分析后,发现这些毒株存在PCV2不同亚型之间的混合感染(主要是PCV2b-1B型和PCV2b-1C型),并且发现一些比较特殊的毒株如YiY-3-2-11和YiY-3-2-3。其中YiY-3-2-11毒株在第1033位核苷酸位点发生突变,由胸腺嘧啶(T)突变成为胞嘧啶(C),导致序列中的原有终止密码子突变成为其他终止密码子,通过与两个亲本毒株的序列比对,认为该突变位点可能是一个PCV2进化的关键核苷酸位点。该结果也说明PCV2可能通过关键的核苷酸突变来进行免疫逃避。另一个突变毒株YiY-3-2-3在ORF1区域的第710位发生突变,由鸟嘌呤(G)突变成为腺嘌呤(A),从而导致该位点由原来的氨基酸突变成为终止密码子,使得该毒株的ORF1翻译提前终止,相应编码的氨基酸也由正常的315个氨基酸缩短为219个氨基酸。为深入研究新发现的ORF1翻译提前终止现象是否对PCV2复制、病毒载量、以及感染能力产生影响,我们将两个亲本毒株YiY-3-2-1和YiY-3-2-10,以及ORF1区域提前终止的毒株YiY-3-2-3构建成感染性克隆质粒,然后将它们分别转染至PK15细胞中,再收获细胞上清液,并将上清液进行荧光定量PCR以及间接免疫荧光检测。检测结果显示ORF1翻译提前终止对PCV2的复制产生显著的影响,且PCV2的病毒载量与PCV2的感染能力呈现正相关性。本研究的结果不仅为PCV2的临床检测及病原的遗传变异分析提供了依据,而且为病毒的致病机理研究奠定了基础。