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目的:拟用生物信息学方法分析铜绿假单胞菌黏附素（Adhesin）蛋白的生物学性质,利用基因工程的方法纯化获得该重组蛋白并检测其免疫活性,为研究铜绿假单胞菌Adhesin蛋白的功能,及其致病机制提供实验基础。方法:1.利用生物信息学方法分析铜绿假单胞菌Adhesin蛋白的生物学特性。2.设计特异性引物,以铜绿假单胞菌DNA为模板,采用PCR扩增Adhesin基因。采用BamHI和HindIII把Adhesin基因以及pET28a进行双酶切,回收,然后用T4 DNA连接酶将它们相连,得到重组质粒pET28a-Adhesin,然后将其转进表达菌BL21,获得重组菌BL21/pET28a-Adhesin。3.诱导并采用亲和层析法纯化Adhesin蛋白,去内毒素,再用BCA法对蛋白进行定量。4.将Adhesin蛋白免疫BALB/C小鼠,分离得到血清,测定血清中抗体的效价以及其亚型。5.分离脾细胞,测定淋巴细胞增殖情况以及分泌的细胞因子情况。结果:1.Adhesin蛋白共含有317个氨基酸,它的分子质量大约为34.3 kDa,等电点是9.2。它在细菌中的半衰期超过10 h,为非常稳定蛋白。Adhesin是一个跨膜蛋白,定位在细胞膜上。2.Adhesin的α-螺旋含量为46.37%,无规卷曲的含量为35.96%,以及β片层的含量为17.67%。并模拟得到了Adhesin蛋白的三级结构。Adhesin蛋白具有多个磷酸化位点和糖基化位点。3.Adhesin蛋白含有多个B细胞表位。4.成功得到能表达Adhesin蛋白的表达质粒pET28a-Ferritin。通过IPTG诱导,能表达大小为37.9 kDa的Adhesin,并得到纯度较好的Adhesin蛋白。5.Adhesin能够诱导小鼠分泌高滴度的抗体,分泌的抗体中IgA和IgM型抗体含量较低。但是接种了Adhesin蛋白小鼠血清中IgG1和IgG2a的含量明显高于对照。6.接种Adhesin蛋白小鼠的脾淋巴细胞能够明显发生增殖。7.Adhesin蛋白能够诱导脾淋巴细胞分泌Th2型细胞因子IL-4和IL-10,但是对Th1型细胞因子TNF-α和IFN-γ没有影响。结论:1.铜绿假单胞菌黏附素蛋白能通过基因工程方法纯化而获得。2.重组铜绿假单胞菌Adhesin蛋白具有良好的免疫原性,可能是通过体液免疫来行使保护功能。