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背景:甲状腺相关性眼病(thyroid associated ophthal—mopathy,TAO)又名Graves眼病(Graves’ophthalmopathy,GO)是一种器官特异性自身免疫性疾病[1]。其症状表现为甲状腺肿大、眼球突出、高代谢综合征,胫前粘液性水肿等。有研究表明,TAO是一种器官特异性的自身免疫性疾病,为细胞及体液免疫在遗传和环境等因素条件下同时作用的结果[2]。TAO主要的病理变化为眼眶后结缔组织和眼外肌的免疫炎性反应,其发病涉及多种因素。因此,TAO已成为内分泌疾病中一个研究的重要课题,本实验从Th1/Th2细胞因子的角度将其与中医辨证分型结合在一起,寻找积极有效的治疗TAO的新方法,为TAO在中医上的治疗提供依据。目的:本研究在前期临床和实验有效基础上,从拮抗Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4对RFs生物学活性影响,调节Th1/Th2失衡方面,探讨泻火平突散、活血平突散、养目平突散治疗TAO的机制。以及观察三种中药复方对IFN-、IL-4刺激后RFs增殖的影响和对IFN-、IL-4刺激后HA和I、Ⅲ型胶原及MMPs、TIMPs等细胞外基质合成的影响。方法:1.原代培养RFs并进行鉴定。眼球后结缔组织取眼外伤或其他眼部手术病人,实验所用细胞在2-8代间。采用倒置相差显微镜观察细胞形态及免疫细胞化学染色法其鉴定。2.RFs与三种中药复方含药血清的不同剂量(10%,20%,30%)一起孵育48小时后,MTT比色法检测,确定最佳剂量。3.RFs与IFN-γ、IL-4及含药血清刺激后MTT比色法检测中药血清对RFs活力影响。4.RFs与IFN-γ(200U/m L)、IL-4(200U/m L)以及三种含药血清共同孵育48小时后Elisa法检测IFN-γ、IL-4对HA和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。5.RFs与IFN-γ(200U/m L)、IL-4(200U/m L)以及三种含药血清共同孵育48小时后,免疫细胞化学染色检测IFN-γ、IL-4和和三种含药血清对MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2表达的影响。结果:1.体外成功培养正常人眼眶后成纤维细胞,光镜下观察从组织块四周长出的细胞,呈放射状,细胞形状为梭形和大多角形,10-14天细胞逐渐生长融合成单层铺满培养瓶底。细胞鉴定结果显示纤维原细胞的标记vimentin为阳性,cytokeration为阴性,提示为纯净的RFs。2.中药复方含药血清对RFs有抑制作用,并在中剂量时最为明显。3.IFN-γ、IL-4刺激后对RFs有增殖作用,加入含药血清后对RFs的增殖有抑制作用。4.IFN-γ、IL-4能够刺激HA和I、Ⅲ型胶原的合成和分泌,三种中药复方含药血清干预后HA和I、Ⅲ型胶原的表达均下降。5.IFN-γ、IL-4刺激后MMPs、TIMPs细胞外基质合成紊乱,中药复方含药血清干预后调节使其平衡。结论:IFN-γ、IL-4能够刺激RFs细胞外基质的合成和分泌增加。中药含药血清在中剂量(20%)时对RFs的增殖有明显的抑制作用。中药含药血清能抑制IFN-γ、IL-4刺激后RFs细胞外基质的合成,从而减少TAO的免疫损伤。