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癌症是指体细胞失去控制的,无限制的增殖,是严重危害人民身体健康的恶性疾病之一。目前癌症的治疗方法包括有手术切除,药物治疗和放射治疗等在内的综合治疗。其中,新兴抗肿瘤药物的开发是当前癌症治疗领域的热点研究方向,大量天然药物及合成药物的相继问世及应用在一定程度上对于提高及改善癌症的预防,治疗及愈后起到了重要作用。河北省是食管癌的高发区,多年来我实验室致力于抗食管癌药物的开发与研究。三萜类化合物羽扇豆醇酯（Lupeol）是从多种食物及抗肿瘤中草药中提取的活性成分,在体外对多种肿瘤细胞如肺癌、前列腺癌、黑色素瘤及白血病细胞均有较好的抑制增殖和诱导分化作用。我实验室在对食管癌细胞系的抗肿瘤效果筛查研究中发现,羽扇豆醇酯对食管癌TE-1细胞具有明显的体外增殖抑制效果,我们并对其药物作用机制进行了进一步的研究,为羽扇豆醇酯的临床开发提供了理论依据。第一部分羽扇豆醇酯对人食管癌TE-1细胞体外诱导凋亡作用及其机制研究目的:观察不同浓度的羽扇豆醇酯体外作用TE-1细胞后细胞形态及超微结构的变化,检测羽扇豆醇酯对TE-1细胞的增殖抑制效果,并从基因及蛋白水平探讨其诱导凋亡作用机理。方法:1将不同浓度（25﹑50﹑10﹑150和200μM）的羽扇豆醇酯分别作用TE-1细胞24、48和72小时,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖抑制率。2 50﹑100和150μM的羽扇豆醇酯分别作用TE-1细胞24小时,瑞式姬姆萨染色后在倒置相差显微镜下观察细胞形态和结构的变化。3 150μM羽扇豆醇酯作用TE-1细胞48小时后,在透射电子显微镜下观察细胞超微结构变化。4采用RT-PCR方法检测50、100和150μM的羽扇豆醇酯分别作用TE-1细胞48小时后,凋亡相关基因Caspase-3﹑-8﹑-9,Fas, Bax和Bcl-2表达的变化。5采用western blotting方法检测50﹑100和150μM的羽扇豆醇酯分别作用TE-1细胞48小时后, PARP﹑Fas﹑Bax和Cyt-c蛋白表达的变化。结果:1经不同浓度（25﹑50﹑100﹑150和200μM）的羽扇豆醇酯作用TE-1细胞24﹑48和72小时后,与正常对照组相比,实验组细胞增殖抑制率在25﹑50﹑100和150μM之间存在显著性差异（P<0.01）。2 50﹑100和150μM的羽扇豆醇酯分别作用TE-1细胞24小时,瑞式姬姆萨染色后在倒置相差显微镜下观察可见细胞凋亡形态学变化,由原来的多边形变为圆形,细胞体积缩小,生长稀疏,可见胞质浓缩等,对照组细胞形态均一,生长密集,未见明显改变。3 150μM羽扇豆醇酯作用TE-1细胞48小时后,在透射电子显微镜下观察可见细胞膜增厚,染色质高度浓缩,边聚核膜下,厚薄不均,形成新月状,部分核膜向外成锐角突起,胞质中可见许多空泡。对照组细胞表面大量微绒毛,胞质内可见线粒体,粗面内质网和游离核糖体。4 RT-PCR分析结果显示,50﹑100和150μM实验组Caspase-3﹑-8﹑-9,Fas和Bax mRNA的表达水平均明显高于对照组, Bcl-2 mRNA的表达水平低于对照组,具有显著性差异（P<0.05）。5 western blotting检测结果显示,50﹑100和150μM实验组细胞中PARP、Fas﹑Bax和Cyt-c蛋白的表达水平高于对照组,具有显著性差异（P<0.05）。结论:羽扇豆醇酯可通过死亡配体途径和线粒体途径双重通路诱导TE-1细胞凋亡,发挥抑制细胞增殖作用。第二部分羽扇豆醇酯对人食管癌TE-1细胞体外阻滞周期作用及其机制研究目的:检测羽扇豆醇酯对TE-1细胞的周期阻滞作用,并从基因和蛋白表达水平探讨其作用机制。方法:1流式细胞技术检测不同浓度（50、100和150μM）羽扇豆醇酯作用TE-1细胞48小时后细胞周期分布及凋亡情况。2 western blotting方法检测50、100和150μM羽扇豆醇酯作用TE-1细胞48小时后,细胞周期蛋白CyclinD1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4的表达变化。3 RT-PCR方法检测50﹑100和150μM羽扇豆醇酯作用TE-1细胞48小时后,细胞周期调节基因p53表达的情况。结果:1流式细胞术显示不同浓度（50、100和150μM）羽扇豆醇酯作用TE-1细胞48小时后,处于G0/G1期的细胞增加, G1期细胞比例明显高于对照组（ P<0.05）,实验组细胞凋亡率高于对照组（ P<0.05）。2 western blotting分析方法结果显示,50、100和150μM羽扇豆醇酯作用TE-1细胞48h后,实验组CyclinD1和CDK4蛋白的表达水平低于对照组（ P<0.05）。3 RT-PCR方法结果表明,50、100和150μM羽扇豆醇酯作用TE-1细胞48h后,实验组p53 mRNA的表达水平高于对照组（ P<0.05）。结论:羽扇豆醇酯能够体外诱导TE-1细胞凋亡,阻滞细胞周期。其作用机理与Lupeol下调CyclinD1和CDK4的蛋白表达,上调抑癌基因p53的表达有关。