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目的:探讨隔药灸治疗UC作用机制;进行溃疡性结肠炎肿瘤信号转导基因芯片研究,并对部分基因进行鉴定。
方法:1.将UC患者随机分为隔药灸组和隔麸灸组,取天枢、关元、气海穴进行治疗,6个疗程结束后,观察两组患者疗效。2.选取患者治疗前后的结肠黏膜,运用组织化学、免疫组化和原位杂交等实验技术与方法,观测结肠组织病理学改变、结肠黏膜粘蛋白分泌情况,结肠COX-2、TNF-α及其mRNA表达,以及Bcl-2、Bax与IL-10、p53、c-mycmRNA表达情况。3.收集5例脾虚型UC患者结肠黏膜进行人肿瘤信号转导基因芯片研究,并应用实时荧光定量PCR方法对差异表达基因COX-2、p21WAF1/CIP1进行鉴定。
结果:1.UC患者具有典型的病理学改变,部分黏膜标本出现黏膜腺体异型增生;结肠粘蛋白表达异常,结肠黏膜中性粘液和酸性粘液分泌减少。2.隔药灸组总有效率为88.9%,隔麸灸组总有效率为71.9%,两组总有效率无显著性差异(P>0.05)。3.隔药灸治疗后COX-2、TNF-α及其mRNA阳性表达面积和平均光密度表达均降低,与治疗前相比P<0.01,P<0.05。隔药灸治疗后IL-10mRNA阳性表达面积和平均光密度升高,与治疗前相比P<0.05,P<0.01;BaxmRNA阳性表达面积较治疗前显著升高(P<0.05);隔药灸组患者结肠黏膜Bcl-2mRNA阳性表达面积较治疗前显著降低(P<0.01);P53、C-mycmRNA阳性表达面积和平均光密度均较治疗前显著降低(P<0.01,P<0.05)。4.肿瘤信号转导基因芯片结果显示UC患者COX-2、MIHC/cIAP2、P21/Waf1/CIP1、MMP10等25条基因表达上调,Creb-2、NAIP、CD31、IL-2等13条基因表达下调。经荧光定量PCR验证,UC患者COX-2基因含量为1.02E+00,正常人为2.32E-01;UC患者p21WAF1/CIP1基因为1.058E-1,正常人为3.580E-2与基因结果基本一致。
结论:1.隔药灸可以通过抑制结肠黏膜TNF-α、TNF-αmRNA的表达,减少COX-2的产生,消除或改善肠道炎症。2.隔药灸可以影响结肠组织Bcl-2mRNA、BaxmRNA的表达水平,调节结肠上皮细胞凋亡的异常增高的状况。3.隔药灸可以通过上调IL-10mRNA的表达,下调结肠组织p53mRNA、C-mycmRNA的表达水平,达到治疗之目的。4.人肿瘤信号转导基因表达研究结果表明,UC患者COX-2基因与p21WAF1/CIP1基因表达上调,荧光定量PCR验证与基因芯片结果基本一致,提示COX-2基因的表达上调与UC发生癌变有密切关系,有可能是UC发生癌变的信号转导通路之一;p21WAF1/CIP1基因表达上调提示与细胞增殖周期负调控作用增强有关。