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虫草素、白藜芦醇、姜黄素和黄酮类等作为天然低毒的抗痛与抗菌化合物,具有广泛的应用前景。但这些化合物的生物活性都比较低。为探讨高活性的天然化合物组合化合物,本文研究了这些物质单独与相互组合对细菌和Hela细胞的生长、及对Hela细胞p53、caspase3蛋白表达的影响。主要结果如下: 1、抗菌活性。分别用50μM、100μM和200μM的各种化合物单独处理大肠杆菌时,染料木素的抑菌最显著,抑菌率分别达到36%,51%和60%;其次是大豆异黄酮和姜黄素;三种不同纯度的虫草素提取物的抑菌效果差异不显著,但浓度效应明显;白藜芦醇、脱落酸、茉莉酸甲酯和花青素有一定的抑菌效果,但无明显浓度效应。用50μM的两种化合物联合处理时,姜黄素与白藜芦醇联用的抑菌效果最强,抑菌率达到57%;三种不同纯度的虫草素提取物与白藜芦醇、姜黄素、染料木素或大豆异黄酮具有协同抑菌效应;白藜芦醇与染料木素或大豆异黄酮具有协同抑菌效应;姜黄素与染料木素、大豆异黄酮或ABA具有协同效应;其余组合无明显协同效应。用25μM的三种化合物组合时,三种不同纯度的虫草素提取物与白藜芦醇和姜黄素组合具有协同抑菌效应,抑菌效果明显高于较高浓度的单品;虫草除多糖提取液或粗提取液与姜黄素和染料木素组合具有协同抑菌效应,抑菌效果明显高于较高浓度的单品。 2、抗癌活性。分别用5μM、25μM、50μM、100μM和200μM的各种化合物单独处理Hela细胞24小时、48小时、72小时,姜黄素抑制癌细胞增殖效果最显著且具有时间和浓度依赖性,5μM的姜黄素处理72小时即可达到64%抑制率;其余化合物抗癌活性比较结果为白藜芦醇>北虫草粗提取物>北虫草除多糖提取物>虫草素>染料木素>大豆异黄酮>花青素>脱落酸>茉莉酸甲酯。姜黄素、白藜芦醇、三种不同纯度的虫草素提取物、染料木素、大豆异黄酮、花青素处理Hela细胞后,均出现细胞膜皱缩、凹陷、染色质致密化、形成凋亡小体等典型凋亡形态。脱落酸、茉莉酸甲酯处理Hela后,未见明显细胞凋亡。 两种50μM化合物组合处理Hela细胞48小时,虫草素与姜黄素组合的效果最好,对Hela细胞的增殖抑制率达到68%;三种不同纯度的虫草素提取物与染料木素、大豆异黄酮、茉莉酸甲酯具有协同抗癌效果;白藜芦醇与姜黄素、染料木素具有协同抗癌效果;姜黄素与茉莉酸甲酯具有协同抗癌效果;染料木素与茉莉酸甲酯具有协同抗癌效果。具有协同效应的两种化合物组合处理细胞后,细胞出现细胞膜皱缩、凹陷、染色质致密、凋亡小体等典型凋亡形态。 三种25μM化合物组合处理Hela细胞48小时,北虫草粗提取物与姜黄素和白藜芦醇组合效果最好,对Hela细胞的抑制率达到了72%;北虫草粗提物与姜黄素、茉莉酸甲酯组合具有明显协同抗癌效果;白藜芦醇与姜黄素、茉莉酸甲酯组合具有明显协同抗痛效果;北虫草粗提物与染料木素、姜黄素组合具有明显协同抗癌效果。具有协同效果的三种化合物组合处理Hela细胞后,细胞出现细胞膜皱缩、凹陷、染色质致密、凋亡小体等典型凋亡形态。 3.可能的抗癌机理研究。免疫荧光细胞化学检测25μM、100μM北虫草三类提取物、染料木素、白藜芦醇、茉莉酸甲酯及其25μM组合处理Hela细胞48小时后Hela细胞中Caspase-3、p53蛋白的表达。白藜芦醇、北虫草粗提取物明显提高p53蛋白和Caspase-3蛋白表达。染料木素和北虫草除多糖提取物、虫草素可以明显提高Caspase-3蛋白表达,但是对p53蛋白的表达无影响。茉莉酸甲抑制p53蛋白表达但是对Caspase-3蛋白的表达无影响。 结论和意义:两种化合物联合用药中姜黄素+白藜芦醇抑菌效果最佳,虫草素+姜黄素抗癌效果最佳;三种化合物联合用药中北虫草粗提取物+姜黄素+染料木素抑菌效果最佳,北虫草粗提取物+姜黄素+白藜芦醇抗癌效果最佳。本研究对抑制细菌感染和治疗癌症过程中天然化合物的联合使用具有一定的指导意义。