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背景及目的:支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,既往认为哮喘是以嗜酸粒细胞(EOS)炎症为特征的变应性疾病。但近年来,越来越多的研究发现有一部分是以中性粒细胞为主,尤其是重症哮喘、难治性哮喘患者,但对于支气管哮喘患者气道内中性粒细胞增多的机制至今并未阐明。本实验在前期细胞及动物研究的基础上主要从临床水平去阐述KLF2与L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18对支气管哮喘患者中性粒细胞粘附迁移的影响。方法:随机收集哮喘患者29例,并按照病情程度分为轻度哮喘组(L组)13例、中度哮喘组(M组)11例、重度哮喘组(S组)5例,并收集与哮喘患者性别及年龄相匹配的健康对照组(C组)12例,进行白细胞分类计数,利用梯度离心法分离中性粒细胞并利用迪夫染色鉴定中性粒细胞,Real-time PCR检测KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18m RNA表达,Western-blot检测KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2蛋白表达,流式细胞术检测L-selectin、CD11a、CD11b、CD18平均荧光强度,ELISA检测血清中IL-8浓度,Transwell小室检测中性粒细胞的迁移能力,粘附实验检测中性粒细胞的粘附能力。结果:1外周血白细胞分类计数C组、L组、M组、S组中性粒细胞百分比(61.35(51.90~65.70)、62.54(54.75~66.12)、70.20(65.34~75.50)、89.84(73.35~94.57))依次呈上升趋势,且M组与C组、L组比较、S组与C组、L组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。轻度哮喘组嗜酸性粒细胞百分比较其他三组高,并且S组与C组、L组比较、M组与L组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。2中性粒细胞的分离及鉴定从外周血中分离出中性粒细胞,通过迪夫染色鉴定中性粒细胞,且分离出的中性粒细胞纯度在95%以上。3各组研究对象外周血中性粒细胞KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18m RNA表达变化Real-time PCR结果显示:C组、L组、M组、S组KLF2m RNA相对表达量(1.03(0.88~1.95)、0.82(0.55~1.31)、0.70(0.37~0.98)、0.65(0.44~0.81))依次呈下降趋势,而L-selectin m RNA的相对表达量(1.01(0.92~1.14)、1.48(1.07~2.07)、2.93(2.62~3.51)、6.41(5.35~6.96))依次呈增加趋势,CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18 m RNA的表达均呈逐渐增加趋势,且以上因子M、S组与C组比较、L组与S组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。4各组研究对象外周血中性粒细胞KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2蛋白表达变化Western blot结果显示:C组、L组、M组、S组KLF2蛋白相对表达量(0.52(0.39~0.61)、0.45(0.39~0.55)、0.37(0.31~0.43)、0.26(0.25~0.30))依次呈下降趋势,且M、S组与C组比较、L组与S组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。而L-selectin蛋白的表达量(0.26(0.22~0.28)、0.35(0.29~0.44)、0.38(0.31~0.46)、0.39(0.36~0.42))依次呈增加趋势,且L、M、S组与C组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。CXCR1、CXCR2蛋白的表达量均呈逐渐增加趋势,且M、S组与C组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。5各组研究对象外周血中性粒细胞L-selectin、CD11a、CD11b、CD18的平均荧光强度流式细胞术结果显示:L-selectin、CD11a、CD11b、CD18的平均荧光强度在C组、L组、M组、S组中依次呈增加趋势,且M、S组与C组比较、L组与S组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。6各组研究对象外周血血清中IL-8表达情况ELISA结果显示:C组、L组、M组、S组血清中IL-8的表达量依次呈增加趋势,且M、S组与C组比较、S组与L组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。7各组研究对象外周血中性粒细胞的迁移情况根据预实验结果选取浓度为100ng/ml的IL-8进行Transwell实验,结果显示:各组研究对象外周血中性粒细胞迁移率:S组>M组>L组>C组,且L、M、S组与C组比较、L组与S组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。8各组研究对象外周血中性粒细胞的粘附情况各组研究对象外周血中性粒细胞粘附能力结果显示:S组>M组>L组>C组,且M、S组与C组比较、L组与S组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。9各组血中性粒细胞KLF2与L-selectin、CXCR1、CXCR2m RNA及蛋白做Pearson相关性分析结果提示两者之间呈负相关。结论:(1)哮喘患者外周血中性粒细胞KLF2的表达随着哮喘严重程度的加重而下降,但是其中性粒细胞粘附迁移能力却随之增强。(2)推测KLF2可能通过调控相关粘附分子(L-selectin、CD11a、CD11b和CD18)以及趋化因子受体(CXCR1、CXCR2)的表达影响支气管哮喘患者中性粒细胞的粘附迁移。