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由于传统方法提取的抗体中特异性抗体含量低,致使其在工业、商业以及科研分析检测、理论研究和疾病诊断与防治等方面应用的局限性。近年来对制备IgY的研究进展仍停留在一些分离纯化方法的优化组合,为了高效精准的提取特异性抗体,同时也为了进一步开发免疫亲和柱提供可靠的数据支撑及方法借鉴,建立一套成熟标准的特异性抗体分离纯化方法是当前迫切需要的。本研究基于以上背景,探究并优化了免疫亲和柱的制备及使用条件,以高纯度酪氨酸酶为抗原免疫蛋鸡,分离提取出卵黄抗体,并利用免疫亲和柱纯化出特异性抗体,最后以效价结果和酶活抑制效果综合判定特异性抗体性能。主要形成以下研究成果：1、研究了配基酪氨酸酶与柱填料的偶联条件,通过单因素实验确定了三因素三水平的正交试验条件,并由正交试验分析得到最佳偶联实验条件以及最终偶联量：偶联浓度为20 mg/mL,pH9,温度为4℃,时间为12h和17.54 mg。探讨了免疫亲和柱使用过程中上样条件对最终获得目的产物的影响,最佳上样条件为：浓度为0.5 mg/mL,流速为0.5mL/min。探究了免疫亲和柱的各方面性能：柱容量为0.2620 mg/mL;重复使用三次目标产物的洗脱率为88.26%,重复5次使用后洗脱率70%左右；4℃下储存10天目标产物洗脱率仍可达到88.73%,效果较为理想。2、利用酪氨酸酶作为抗原进行免疫注射产生的IgY情况进行了探究。结果表明经3次加强免疫注射后,免疫组鸡蛋中的卵黄抗体含量基本趋于稳定且达到目标理想效价。提取分离后实验分析可知,第七周IgY的效价达1：1000左右。对IgY的热稳定性及酸碱稳定性进行了探讨。实验结果证实,不同的温度和酸碱度的处理条件下,IgY仍可保持良好的免疫活性。作用温度区域为35-70℃之间时,其生物活性及效价非常稳定；在pH 4-7的区域内,粗提取IgY效价一直保持在最高值的50%以上,表现出较高稳定性。在粗提取卵黄抗体的酶活抑制实验中,阴性组和阳性组均表现出了部分抑制能力。粗提取阳性组平均酶活抑制率为27%以上,粗提取阴性组平均酶活抑制率为16%左右。实验结果证明该粗提取IgY具有部分抑制酪氨酸酶的性能,但效果不突出,作用不稳定。3、利用免疫亲和层析柱对粗提取酪氨酸酶IgY进行分离提取,收集洗脱峰获得特异性IgY,回收率为62.91%。该亲和层析柱对分离纯化特异性酪氨酸酶IgY具有非常显著的效果,过柱经免疫亲和层析后抗体效价提高18倍以上。酶活抑制实验中,相较于粗提取IgY效果,特异性IgY酶活抑制效果持续且高效,抑制率高达80%以上;且对各浓度梯度的酶液均表现出高效且持续的酶活抑制效果。