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目的:从肝功能、肝脏病理及(血、肝和胆中)胆汁酸成分含量的变化探讨甘草对ANIT所致IHC(肝内胆汁淤积症)小鼠肝脏的保护作用。 方法: 1.雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、甘草低剂量组(GC-L,1.13 g/kg/d)、甘草中剂量组(GC-M,2.25g/kg/d)及甘草高剂量组(GC-H,4.50g/kg/d)。每天给药1次,共10天。除正常组外,其余各组于第7天、第10天给药1h后再次给与ANIT油溶液(100mg/kg)造模。检测TBIL、ALT、AST和ALP水平,HE染色观察肝脏病理变化。 2.用活性炭吸附空白基质胆汁酸本底,采用乙腈沉淀蛋白法提取胆汁酸,建立同时测定小鼠血、肝和胆中CA、CDCA、DCA、LCA、GCA、GCDCA、GDCA、TCA、TCDCA和TDCA等10种胆汁酸的LC-MS/MS检测方法,并进行方法学考察,测定小鼠血、肝和胆样品中10种胆汁酸成分的含量。 结果: 1.与正常组相比,模型组小鼠的血浆ALT、AST、ALP和TBIL水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,甘草低、中剂量组的ALT、AST和ALP差异虽无统计学意义,但有下降趋势;甘草高剂量组ALT、AST和ALP水平明显降低(P<0.05),其中以AST降低最为显著(P<0.01);各治疗组对TBIL均无降低作用。与正常组相比,模型组胆管上皮细胞破坏,炎性细胞浸润,胆管狭窄,肝细胞空泡坏死明显;各治疗组肝组织病变均有不同程度改善,呈剂量依赖性。 2.①建立的血、肝和胆中胆汁酸的LC-MS/MS检测方法线性良好,精密度、准确度、提取回收率等均符合生物样本分析要求。 ②小鼠血浆中,模型组10种胆汁酸的总量较正常组显著提高;4种游离型胆汁酸中,初级胆汁酸CA显著升高,CDCA基本不变,次级胆汁酸DCA、LCA均有下降;结合型胆汁酸均显著升高,其中TCA、GCA尤为明显(P<0.001);与模型组比较,各治疗组胆汁酸略有下降,其中以甘草高剂量组中CA降低最为明显。 ③小鼠肝脏中,模型组10种胆汁酸的总量较正常组显著升高,初级胆汁酸CA升高2.35倍,CDCA升高1.42倍,次级胆汁酸DCA、LCA略有下降,结合型胆汁酸(以牛磺酸结合的TCA、TCDCA为主)明显升高,而TDCA因DCA的下降而有所降低。与模型组小鼠相比,各治疗组胆汁酸总量均显著下降,且具有剂量依赖性;各个胆汁酸成分的含量均有下降,以甘草高剂量组最为明显。 ④小鼠胆汁中,模型组胆汁酸的总量较正常组显著下降,可检测到的胆汁酸成分也均显著降低;与模型组小鼠比较,各治疗组胆汁内可检测到的胆汁酸均增高,高剂量组的TCA和总胆汁酸增高显著。 结论: 1.利用ANIT成功地复制了肝内胆汁淤积小鼠模型。模型小鼠的胆管上皮细胞受损,炎性细胞浸润,胆管阻塞,伴有肝细胞空泡坏死和肝功能损害。 2.建立的LC-MS/MS法通过方法学确证,是灵敏、快速、简便的检测血、肝及胆中胆汁酸的方法。 3.甘草水煎液可改善胆汁淤积小鼠的肝坏死和肝功能,对胆汁淤积小鼠的肝脏具有一定的保护作用。甘草水煎液可促进胆汁酸经胆排泌,减轻胆汁酸的肝脏负荷,并呈剂量依赖性,以甘草高剂量(1.13 g/kg/d)作用最为明显。