肝癌炎症微环境中PRR11及循环免疫细胞与肿瘤转移复发的关系研究

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目的:分析PRR11在肝癌细胞中的表达水平并以R N A i技术靶向PRR11基因干扰后研究其对肝细胞迁移和侵袭的影响,并比较分析循环免疫细胞对肝细胞癌根治术预后的预测能力。  方法:首先通过免疫组化及蛋白印迹实验研究50例肝癌及癌旁组织中PRR11蛋白的表达水平,通过蛋白印迹实验检测肝癌细胞株HepG2及SMMC-7721及正常肝细胞株L02中PRR11蛋白的表达情况,再使用R N A i技术靶向SMMC-7721的PRR11基因后应用CCK8、划痕实验、Transwell检测PRR11低表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,最后通过比较不同循环免疫细胞对HCC根治术预后的预测能力。根据我院305名接受H C C根治性肝切除术的患者,我们构建了预测H C C根治术无复发生存期(R F S)和总生存期(O S)的nomogram列线图预测模型,并进行内外验证。同时,将列线图的预测准确性与六种常用的HCC分期系统进行比较。  结果:免疫组化及蛋白印迹实验结果显示,PRR11在肝癌中的表达量明显髙于癌旁组织(1.114±0.215和0.644±0.071),其PRR11蛋白表达水平与肿块大小、门静脉是否受侵犯、Edmondson分级、TMN分期、是否复发转移及N M L R比值大小有关,同时,PRR11在HepG2及 SMMC-7721中的表达也明显高于L02(分别为1.219±0.034、1.213±0.081及0.839±0.038),下调PRR11的表达后,能抑制肝癌细胞的增值、迁移和侵袭,通过苏木精-伊红(HE)染色评估主要群组癌旁肝组织中的坏死炎症活性。我们发现,与其它循环免疫细胞预后评分系统相比,在RFS(A U C=0.603)和OS(A U C=0.726)的样本特征曲线(AUROC)值下,嗜中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞比率( N M L R)的预测能力更具特异性和准确性。多因素分析发现,RFS或OS的独立预测因子,包括甲胎蛋白(AFP)、肿瘤大小、肿瘤数量、微血管侵犯和NMLR,这些指标纳入建立RFS和O S列线图预测模型。在主要队列中(n=305),RFS和O S列线图的C指数分别为0.705和0.797。R O C分析显示,相比较A JC C临床分期系统(0.577和0.622), BCLC临床分期系统(0.626和0.670),CLIP临床评分系统(0.657和0.695),JIS评分系统(0.574和0.637),Okuda评分系统(0.539和0.540)和 Vauthey系统(0.635和0.694),两种列线图的A U C值较大(R F S为0.664,O S为0.821),这些结果通过内部(n=142)和外部验证(n=169)进行验证。RFS的列线图预测概率与癌旁组织坏死性炎症活动评分(r=0.304,P<0.001)相关。  结论:PRR11蛋白在肝癌组织中髙表达,PRR11低表达后能抑制肝癌细胞的增值、迁移和侵袭,构建的包含N M LR等独立预测因子的RFS或O S列线图对HCC根治术后患者的预后能进行准确预测。
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