【摘 要】
：
以人外周血液提取的总DNA为模板,PCR扩增人朊蛋白编码基因(PRNP)的ORF,克隆至pMD18T载体,构建重组质粒HoPRNP-T,用DNAstar软件与GenBank上发表的序列M13899进行同源性分析,结
论文部分内容阅读
以人外周血液提取的总DNA为模板,PCR扩增人朊蛋白编码基因(PRNP)的ORF,克隆至pMD18T载体,构建重组质粒HoPRNP-T,用DNAstar软件与GenBank上发表的序列M13899进行同源性分析,结果发现核苷酸序列同源性为99.6﹪,氨基酸序列同源性99.8%。以HoPRNP-T质粒为模板,扩增出编码人成熟朊蛋白(mature prion protein,mPrP)的基因片断,与pET30a(+)表达载体连接,构建出表达人mPrP的重组质粒pET-homPrP。经酶切鉴定后电转化pET-homPrP至宿主菌E. coli BL21 (DE3)中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示表达产物为分子量为约30ku的融合蛋白。超声波裂解重组菌体后用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白,以SDS-PAGE检测纯化的表达产物,表明亲和层析法纯化的融合蛋白纯度可达到90%。再以SAF70进口单抗为检测抗体,Western-blotting显示融合蛋白具有良好的反应原性。以纯化的融合mPrP作为免疫原,以含有pET30a(+)空载体的E. coli BL21 (DE3)的菌体蛋白作为对照免疫原,分别与弗氏完全佐剂1:1混合乳化,按100μg/只剂量皮下分3点注射8周龄清洁级BALB/c雌性小鼠,在第3周和第5周以同法、同剂量弗氏不完全佐剂乳化的两种免疫原分别进行加强免疫,第3次免疫3天后摘眼球取血,用间接ELISA法检测抗血清的效价。结果表明抗人mPrP的血清效价为1:512; Western-blotting比较分析也显示此抗血清具有很强的特异性。此实验结果为进一步研究人朊蛋白结构和制备出相应的单克隆抗体奠定了基础。
其他文献
文言文是中华传统文化凝结出的一块瑰宝,它虽然文字简练,但寓意丰富,充分体现了新课标“认识中华文化的丰厚博大”和“培植热爱祖国语言文字的情感”的要求.但是,由于其历史
当前小学语文教学的主要目标是培养学生的听、说、读、写能力,在实际教学过程中,小学语文教学主要围绕着阅读展开,通过语文阅读来培养学生的其他语文能力,因此,在小学语文教
由著名编剧陈彦创作,著名导演查明哲执导,陕西省第一位“梅花奖”得主、一级演员李东桥领衔主演的大型秦腔现代戏亮相舞台以来,引发了古城西安观剧狂潮,激起了观众的强烈反响
我矿PE600×900腭式破碎机偏心轴经过多年的使用,两处磨损严重(如图1)。为修复使用,我们在A处采用热喷涂工艺进行修复,在B处采用镶套铆合方法,其工艺如下。
My mine PE600
采用广角X射线衍射(WAXD)与偏光显微镜(POM)等手段研究了硅氧烷液晶共聚物(LCP-O2)作为新型成核剂对聚丙烯(PP)共混样品结晶结构与形态的影响.结果表明,低浓度的LCP-O2在PP共
随着教育教学改革的不断发展,评价已经成为教育领域的重要内容.为了更好的适应社会需求,教学评价得到了有效变革.而评价主要是为了对学生的学习经历进行了解,促进良好学习的
创新是时代的主题和社会发展的根本动力,一个民族只有在不断创新才能实现由古老到新生的嬗变,否则只能走向衰落或者陷入无法脱身的陈旧泥淖而苦苦挣扎.一个国家只有在创新发
口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)感染引起的偶蹄动物的高度接触性传染病,是世界上最重要的动物传染病之一,国际兽疫局(OIE)及我国都将该病列为A类
小学音乐教学,在传统教学模式当中,并没有受到教师和学生们的重视,这主要是因为音乐教学的教学效果,和学生们的学习成绩没有直接关联,在应试教育体制当中如果科目之间没有和
在教学改革如火如荼进行的过程中,出现很多全新的教学方式,在进行问题解决的过程中,也出现更多角度的思考方式,在当前的小学数学教学当中,教师们也开始注重让学生们在解决问