酵母蛋白功能研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ll05
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目前人们发现,酵母胞外蛋白的作用并不仅限于酶功能。酵母分泌蛋白质实现了细胞与环境之间的沟通,一方面蛋白质分泌出去之后,菌体内的环境就会保持了相对的平衡与稳定;另一方面其表现为菌体本身对外界环境的适应程度而做出的反应。尽管如此,现在对微生物分泌蛋白的研究很少,尤其是酵母分泌蛋白。本实验提取了酿酒酵母(Saccharomyces cemvisiae)在生长过程中的对数期(培养至20小时)和稳定中期(培养至60小时)的分泌蛋白作为研究对象。为了避免外来蛋白所带来的干扰,本实验使用了YNB培养基,此培养基不含外源蛋白,一定程度上保证了提取到的分泌蛋白全由酿酒酵母所产生。实验过程中,酿酒酵母发酵液通过离心,超滤和透析后得到了纯度很高的蛋白。此实验设计可以迅速提取到酿酒酵母FFC2144所分泌的蛋白。与传统的提取方法相比,大大缩短了酿酒酵母FFC2144分泌蛋白提取的时间和提高蛋白的纯度及提取率;本实验通过向正常的液体培养基内加入提取到的分泌蛋白,再接种三种酵母,分别为酿酒酵母FFC2144,酿酒酵母FFC2146和麒麟酵母。与各自的空白组作对照,比较两种培养条件下酿酒酵母的生长情况、酿酒酵母降糖以及有机酸积累的变化情况。实验发现,添加了酿酒酵母FFC2144前期的分泌蛋白会提高三种酵母的生长速率,而有机酸的积累上升,降糖速率升高;而在添加了后期的分泌蛋白的发酵液里,三种酵母的生长都受到了抑制,降糖速率下降,有机酸的积累速率变慢。本实验结论:实验提取到的分泌蛋白种类很多,其中的蛋白会起促进或者抑制生长作用。当酿酒酵母培养至对数期时,营养成分充足,菌体的生长速率达到最高峰,而此时起着促进生长作用的蛋白就会占领着主导地位;而当酿酒酵母培养至稳定期时,由于营养成分的有限,再加上菌体的密度大,起着抑制生长作用的蛋白就会影响酵母菌体从而达到了降低生长速率的效果。对分泌蛋白样品进行质谱鉴定,共鉴定出7种不同物种的蛋白。分别为Cytochrome c; Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit C; Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; Histone H2B1; Mitochondrial intermediate peptidase; Superoxide dismutase [Cu-Zn]。这些蛋白起着促进或者抑制菌体生长的作用,在酵母的培养过程中共同调控其生长。
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