论文部分内容阅读
葛根芩连汤源于张仲景《伤寒论》,由葛根、黄芩、黄连、甘草等中药组成,用于治疗湿热下痢,现用于治疗湿热蕴脾证糖尿病,且临床有效,药效学实验也证实了其有效性。但葛根芩连汤的作用机制及其活性成分的转运、代谢过程至今还不清楚。阐明复方中药制剂对疾病的作用是中药的研究热点。目前,葛根芩连汤治疗如2型糖尿病、溃疡性结肠炎等复杂性疾病的机制尚不清楚,其相关研究需要明确葛根芩连汤在体内吸收和代谢状况。近年来液相色谱-质谱联用技术成为中药复方代谢组学和药代动力学研究的重要工具,本论文采用液相色谱-质谱联用分析技术,与代谢组学和药代动力学研究方法结合,联合对葛根芩连汤临床疗效机制和药理进行了比较系统研究,首次探索葛根芩连汤治疗2型糖尿病和溃疡性结肠炎大鼠的代谢途径,并探讨其活性成分体内代谢和肠吸收规律,为其临床疗效的科学性提供依据及临床用药方案提供参考,并为其他中药复方研究提供借鉴。本论文的研究内容核心是：建立基于UHPLC-Q-TOF/MS对葛根芩连汤治疗2型糖尿病和溃疡性结肠炎代谢途径分析方法：建立基于HPLC/MS/MS对口服葛根芩连汤大鼠血浆中11种有效成分体内代谢规律和大鼠外翻肠囊模型中葛根芩连汤活性成分肠吸收规律研究方法。具体内容如下：1.以葛根芩连汤中葛根素、黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、甘草苷、小檗碱、巴马汀等多种有效成分为检测指标,建立了运用多波长反相高效液相色谱(MWD-RP-HPLC)法同时测定葛根芩连汤中上述有效成分含量的测定方法,为葛根芩连汤后续的治疗STZ诱导糖尿病大鼠和溃疡性结肠炎大鼠的代谢组学研究,及药代动力学和肠外翻吸收研究提供质控评价指标。2.采用UHPLC-Q-TOF/MS技术,以STZ诱导大鼠2型糖尿病为模型,对葛根芩连汤治疗2型糖尿病大鼠的血浆进行代谢组学研究,从整体代谢调控模式证实了葛根芩连汤治疗2型糖尿病的作用,筛选鉴定了7个潜在的生物标志物,主要涉及鞘氨醇代谢,CoA生物合成,初级胆汁酸生物合成,烟酸合成等代谢途径,研究发现葛根芩连汤通过调节这些失衡的代谢途径而发挥治疗2型糖尿病的作用。3.采用UHPLC-Q-TOF/MS技术分析葛根芩连汤对溃疡性结肠炎模型大鼠的血浆成分谱变化和模式识别方法,寻找并解释标志物归属,匹配相关代谢通路和代谢网络,进一步阐释葛根芩连汤对溃疡性结肠炎治疗作用的机制。4.采用HPLC-MS/MS技术,建立准确、灵敏地同时检测大鼠血浆中葛根素、大豆苷元、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、小檗碱、巴马汀、药根碱、甘草苷、甘草素11个有效成分血药浓度的分析方法,并用于研究口服葛根芩连汤大鼠血浆中药代动力学特征,以便阐述葛根芩连汤中多种有效生物活性成分之间药代动力学及药理学的相互作用,从而指导临床合理安全用药。5.建立运用HPLC-MS/MS准确、灵敏地同时检测大鼠肠吸收液中葛根素、大豆苷元、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、小檗碱、巴马汀、药根碱、甘草苷、甘草素11个有效成分浓度的方法,并用于研究大鼠外翻肠囊吸收模型中葛根芩连汤中11个有效成分的吸收动力学特征,通过外翻肠囊生物模型研究葛根芩连汤多效应成分在肠道的吸收动力学机制,并比较葛根芩连汤中黄酮类和生物碱类各效应成分间吸收情况的差异,从吸收动力学特征上,为选取黄芩苷、小檗碱作为适宜的黄酮类、生物碱类成分标志物来表征整方药代动力学提供依据。