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1.伪狂犬病病毒鄂A株TKˉ/gEˉ/gⅠˉ基因缺失疫苗的研制：该研究首先用gE转移质粒pSPFZ与PrV EaTKˉ基因组DNA共转染猪肾传代细胞IBRS-2,在X-gal存在下进行蓝斑筛选,挑取蓝班进行空班纯化,空班纯化三次后获得重组病毒PrV Ea TKˉ/gEˉ/LacZ<+>突变株.对含有完整gE、gⅠ基因的质粒pSKFB用StrⅠ和BamHⅠ进行酶切,回收5753bp的片段连接,得到gE/gⅠ缺失转移质粒pFBBS.序列分析表明,该质粒缺失了从gⅠ基因StuI位点到gE基因BstEⅡ位点共计1247bp的片断.将质粒pFBBS与EcoRⅠ线性化的PrV EaTKˉ/gEˉ/LacZ<+>突变株基因组DNA共转染IBRS-2细胞.经过空斑筛选获得PrV EaTKˉ/gEˉ/gⅠˉ突变株.Southern杂交结果显示,PrV Ea BamHI-7片断约6.6kb,而PrV EaTkˉ/gEˉ/gⅠˉBamHI-7片断约5.5kb,证实gE/gⅠ基因已经缺失.将接毒细胞冻融液进行蛋白质斑点杂交试验,以鼠抗gE单克隆抗体为一抗,以羊抗鼠ⅠgG为二抗,结果PrV EaTKˉ/gEˉ/gⅠˉ及细胞对照均为阴性,而PrV Ea为阳性,证实gE/gⅠ缺失后,突变株不能产生相应的糖蛋白.在获得PrV Ea TKˉ/gEˉ/gⅠˉ突变株后,我们对其生物学特性进行了系统的研究.2.PrV Bartha株TKˉ/LacZ<+>突变株的构建：用TK基因转移质粒pUEKPZ与PrV Bartha基因组DNA共转染,经过蓝斑筛选和空斑纯化获得重组病毒PrV Bartha TKˉ/LacZ<+>突变株.TK基因缺失后,PrV Bartha TKˉ/LacZ<+>突变株免疫的Balb/C小鼠能够存活,而同样剂量的PrV Bartha却引起部分小鼠死亡.表明该突变株生物安全性大大提高.3.伪狂犬病病毒-猪2型圆环病毒ORF2基因转移载体的构建：伪狂犬病病毒具有较大的基因组,有很多非必需基因和不编码区,这在这些区域插入外源基因构建二价基因工程疫苗是可行的.该研究以猪2型圆环病毒的基因组克隆pTPCV2为材料,用HindⅢ和EcoRV进行酶切,回收1023bp含ORF2基因的片断.将PCV2的ORF2基因插入gE基因缺失转移质粒pSKIECMV中,得到重组子pICORF2.以PK-15细胞、pTPCV2、pIEORF2为模板,扩增ORF2基因494bp的片断,结果从pTPCV2、pIEORF2中能扩出ORF2基因,而PK-15细胞从不能扩出.这为构建伪狂犬病-猪2型圆环病毒二价重组病毒打下了基础.