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目的:探讨EGb对癫痫点燃模型幼鼠学习记忆等认知功能的影响及可能机制,为临床应用EGb治疗癫痫儿童认知功能障碍提供实验依据。
方法:选择生后21日龄SD大鼠,随机分为正常对照组(NS组)、模型对照组(PT27d组、PT214d组)以及银杏叶提取物治疗组(EGb7d组、EGb14d组),应用戊四氮(pentetrazole,PTZ)制作慢性点燃癫痫模型;使用Y-型迷宫测试模型建立前后及EGb治疗前后大鼠行为学变化;通过免疫组化法观察大鼠点燃成功后EGb7d或EGb14d治疗对海马区细胞增殖情况的影响;同时通过标记5-溴脱氧尿核苷(BrdU)、NeuN、GFAP观察神经干细胞(NSCs)分化情况。
结果:
1、慢性点燃模型的建立及癫痫行为学观察:NS组无癫痫发作,其余4组大鼠在点燃后均达到连续5次Ⅱ级以上发作。
2、Y-型电迷宫测试结果:EGb治疗前,PTZ各点燃大鼠与NS组相比,达到学会标准所需的电击次数明显增多(P<0.01);EGb(300mg/kg.d)治疗7d和14d后的两组大鼠达到学会标准的电击次数均明显少于相应的PTZ点燃对照组(P<0.01),而EGb7d和EGb14d治疗组,达到学会标准所需的电击次数未见明显差异(P>0.05)。
3、NSCs增殖情况:选择Nestin阳性细胞表达作为判断NSCs增殖的指标,结果我们发现PTZ点燃组Nestin阳性细胞表达量较NS组明显增多(P<0.01);EGb7d组和EGb14d组Nestin阳性细胞表达量较相对应PTZ点燃对照组的表达又进一步有所增多(P<0.05),但是随着7d至14dEGb疗程的增加,EGb14d组Nestin阳性细胞数量要低于EGb7d组(P<0.05),所有增殖的Nestin阳性细胞均主要分布于海马CA1、CA3区颗粒细胞层和颗粒细胞下层。
4、NSCs分化情况:EGb治疗后BrdU/NeuN细胞数明显多于EGb治疗前(E7和E14组),而且EGb14d组的BrdU/NeuN阳性细胞表达百分比又高于EGb7d组,差异均有统计学意义(P<0.05)。同时在EGb治疗组有4%-5%共表达GFAP,阴性对照组无免疫反应产物。
结论:反复痫性发作可以导致幼鼠学习记忆能力下降,EGb可以明显改善点燃幼鼠的学习记忆功能并可能与EGb诱导神经干细胞增殖、分化有关。