【摘 要】
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纤维素酶是天然纤维生物降解最主要的酶类,木霉是目前发现的产纤维素酶能力最强的微生物,其高效的纤维素酶表达系统是研究丝状真菌表达调控的最好材料之一.该研究以目前国内
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纤维素酶是天然纤维生物降解最主要的酶类,木霉是目前发现的产纤维素酶能力最强的微生物,其高效的纤维素酶表达系统是研究丝状真菌表达调控的最好材料之一.该研究以目前国内最主要的纤维素酶高产菌株康宁木霉为对象,对其纤维素酶最主要的基因cbh及其表达系统进行了研究.通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增得到纤维素酶高产菌K801的纤维二糖水解酶(CBHⅡ)基因全序列,并克隆到pGEM-TeasyVector.序列分析表明,所克隆的cbh2基因长1611bp,包含了纤维二糖水解酶基因的完整编码区序列,并含有三个真核生物典型的内含子序列,其中四个外显子序列共同编码一个471aa的蛋白质.该序列是首次报道的康宁木霉cbh2编码区全序列,与国外报道的里氏木霉(T.reesei)cbh2序列同源性达到99.89﹪,只有两个碱基差别,而推测的氨其酸序列只有一个疏水性氨基酸之间发生替代,在推测的氨基酸序列上同时发现3个潜在的N-糖基化位点.结果表明,以纤维素酶cbh表达元件构建的木霉表达载体pTP系列能够在木霉受体菌中表达外源基因lacZ和uidA,并在胞外分泌具有活性的LacZ和GUS.
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