水稻MADS-box家族基因克隆和OsMADS6转基因水稻的分子鉴定与表型初步分析

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MADS-box转录因子家族是真核生物一类重要的转录调控因子,在植物的信号传导和生长发育调控中起着重要作用。MADS-box转录因子具有56~58个氨基酸组成的高度保守MADS结构域。MADS-box基因在植物营养生长和生殖生长中都起重要作用,经典的花器官发育ABCDE模型中除了AP2基因外都是MADS-box基因。在控制开花时间,花器官的发育、花分生组织的确定、育性及花粉的发育、果实发育等起重要作用。水稻是我国主要的粮食作物之一,水稻生产在我国粮食生产和农业发展中具有重大的战略意义。因此,水稻MADS-box家族基因的功能研究很有必要。本研究以粳稻品种日本晴(Oryza sativa L. japonica. cv. Nipponbare)为试验材料,从水稻各组织中克隆了MADS-box转录因子基因家族中的65个基因,分别构建到连有转录激活子的表达载体VP64-pCambia1301和转录抑制子的植物表达载体EAR-pCambia1301中。以农杆菌介导的方法进行水稻遗传转化,获得共计38个基因的1218个转基因株系。对获得的MADS-box转基因水稻T1代种子进行潮霉素筛选,对T1代苗进行田间观察,发现VP64-OsMADS6、VP64-OsMADS7、VP64-OsMADS58、VP64-OsMADS74转基因大多数株系比对照晚花,其中转OsMADS6-5, OsMADS6-14, OsMADS6-21, OsMADS6-31, OsMADS6-43,OsMADS6-48等转基因株系比野生型晚花,且株高高于野生型。对OsMADS6(Os1g18440)转基因苗进行DNA检测并测序,结果表明OsMADS6基因已整合进水稻基因组中,Western-blot检测结果证实转化的OsMADS6基因得到表达。OsMADS6可能对水稻光周期有影响,通过推迟花期,延长了营养生长期,从而使株高、产量比对照增加。
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