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目的:研究荔枝壳原花青素(Procyanidins extracted from the litchi pericarp,LPPC)对载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E-knock out,apoE-KO)小鼠动脉粥样硬化病变的保护作用以及对肝脏脂代谢相关基因mRNA表达水平的影响。探讨荔枝壳原花青素通过调节肝脏脂代谢紊乱发挥抗动脉粥样硬化的作用及其机制。 方法: 1.雄性C57BL/6小鼠12只,体重18-22g,5周龄;载脂蛋白E基因敲除(apoE-KO)小鼠24只,体重18-22g,5周龄;适应性喂养1w后,将apoE-KO小鼠按体重随机分为2组。共分3组:A:control组,B:apoE-KO组,C:apoE-KO+LPPC(100mg/kg/d)组。A组C57BL/6小鼠普通饲料喂养,B组和C组apoE-KO小鼠高脂饲料(21％脂肪,0.15%胆固醇)喂养。A组和B组给予超滤净水器净化后的水灌胃,C组给予LPPC(100mg/kg/d)溶液灌胃,实验为期24w,每周记录小鼠的进水量及进食量,每周称重一次。 2.实验结束后收集各组小鼠的血液标本,测定血清中的甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)水平及谷氨酸丙氨酸氨基转移酶(glutaminateal aninetransaminase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性。分离小鼠肠系膜脂肪,肾周脂肪,睾周脂肪,称重并计算脂肪/体重比。分离小鼠主动脉血管,取主动脉弓石蜡包埋并制作病理切片,行HE(Hematoxylin-Eosin)染色观察小鼠主动脉血管动脉粥样硬化的程度。分离肝脏组织,测定肝脏中TG和TC的水平,并取部分肝脏组织制作冰冻切片用油红O染色观察肝脏脂质沉积的情况。 3.取小鼠部分肝脏组织,提取组织总RNA,通过实时定量PCR法检测肝脏中固醇调节元件结合蛋白-1c(Sterol regulatory element binding protein,SREBP-lc),乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA carboxylase,ACC),胆固醇调节元件结合蛋白(Sterol regulatory element binding protein,SREBP-2),羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA,HMG CoA reductase),三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter-1,ABCA1),肝X受体α(liver X receptorα,LXRα),肝X受体β(liverXreceptorβ,LXRβ),过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator–activated receptorα,PPARα),法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR),小异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)等基因mRNA的表达水平。 结果: 1.各组小鼠进食进水量没有显著性差异。apoE-KO组小鼠的体重增长量显著性高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。而LPPC干预的apoE-KO小鼠较未干预的apoE-KO组小鼠体重平均下降了7-8g。 2.通过主动脉弓石蜡切片HE染色观察,我们发现apoE-KO组小鼠血管内壁有大量粥样斑块形成,证明我们动脉粥样硬化模型建立成功。apoE+LPPC组小鼠较apoE-KO组小鼠血管内泡沫细胞聚集和粥样斑块沉积的情况得到了良好改善,通过肝脏油红O染色的结果发现LPPC干预后肝脏脂质浸润情况也有所改善。 3.与control组小鼠相比,apoE-KO组小鼠血清TC和TG含量显著性升高(P<0.05),血清ALT和AST水平显著升高(P<0.05),肝脏TC和TG含量显著升高(P<0.05)。与apoE-KO组小鼠相比,apoE-KO+LPPC组小鼠血清TC、TG含量,ALT水平明显下降(P<0.05),AST水平差异无统计学意义(P>0.05),肝脏TC和TG含量均明显下降(P<0.05)。 4.与apoE-KO组小鼠相比,LPPC干预组apoE-KO小鼠肝脏PPARα、FXR、SHP、ABCA1、LXRαmRNA表达水平显著增加(P<0.05),同时SREBP-2,HMG-CoA还原酶mRNA的表达水平显著降低(P<0.05)。 结论:荔枝壳原花青素对apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的形成有较好的保护作用,可能是通过调控与肝脏脂质代谢平衡有关的基因表达,有效的调节肝脏脂质代谢,降低血脂水平,显著减轻肝脏脂肪沉积对肝脏的损伤,减少高脂症对心脑血管系统的损伤来发挥其抗动脉粥样硬化的作用。