论文部分内容阅读
目的完善血管瘤内皮细胞体外培养方法,观察其生长规律及生物学特性;探讨重组人血管内皮抑制素对血管瘤内皮细胞作用的机理。方法用组织块法培养血管瘤内皮细胞体,待长成单层细胞以后传代,建立血管瘤内皮细胞系,观察其增殖特征,绘制生长曲线,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定。重组人血管内皮抑制素作用于血管瘤内皮细胞后,在24、48、72小时不同时间点下观察其形态变化,采用四甲基偶氮唑盐溶液法检测不同浓度重组人血管内皮抑制素对血管瘤内皮细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测重组人血管内皮抑制素对血管瘤内皮细胞早期凋亡的影响。结果1.培养的血管瘤内皮细胞于4天后开始贴壁生长,一周后只有少量细胞铺展贴壁生长,两周后开始生长分裂,三周后细胞开始快速生长,四周后,细胞铺满板底。用相差倒置显微镜观察,发现所分离的内皮细胞呈上皮细胞形态。培养细胞第Ⅷ凝血因子相关抗原表达为阳性。2.重组人血管内皮抑制素作用后,光镜下可见血管瘤内皮细胞发生弥散性坏死,四甲基偶氮唑盐溶液法检测显示,在24h,48h,72h处理组吸光度值随药物浓度的增加均降低,差异具有显著性(P＜0.05),与低浓度组(15.625ug/ml)比较,较高浓度组具有同样的变化趋势(P＜0.05);抑制率随药物浓度和作用时间的增加而递增。3.流式细胞术显示随着药物浓度的增加血管瘤内皮细胞的早期凋亡率逐渐上升,差异有显著性(P＜0.05),与低浓度组(15.625ug/ml)比较,较高浓度组具有同样的变化趋势(P＜0.05)。结论1.用组织块法培养人血管瘤增殖期内皮细胞易成活。分离的细胞能贴壁生长,生长曲线的停滞期、稳定期长,于三周后才达到对数生长期。2.重组人血管内皮抑制素不仅对血管瘤内皮细胞增殖有抑制作用,而且能促进其早期凋亡。