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目的构建恶性黑色素裸鼠移植瘤模型,利用前期课题组制备的Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒,经尾静脉将该微粒注射入荷瘤裸鼠体内,先观察Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒在裸鼠体内的靶向性,而后研究其对抑制裸鼠移植性恶性黑色素瘤的血管生成和肿瘤生长的作用,以期为将来恶性黑色素瘤的体内基因靶向治疗提供新的途径和研究依据。方法培养并传代恶性黑色素A373细胞,将其制成单细胞悬液,而后将单细胞悬液的细胞密度调整至约5×107个/ml。将制备好的恶性黑色素瘤A375单细胞悬液用100ul微量进样器,接种到20只雄性裸鼠的右腋皮下,100ul每只,以构建裸鼠恶性黑色素移植瘤模型。接种三天后,将荷瘤鼠随机分成对照组和实验组两组,每组10只。对照组裸鼠均采用尾静脉给药法向裸鼠体内注射400ul生理盐水;同时采用尾静脉给药法向实验组裸鼠体内注射Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒0.12mg/ml,随后紧贴裸鼠右腋皮下放置一磁性为4000GS的外加稳定磁场,作用60min后撤去磁场,每3天一次。观察并记录裸鼠恶性黑色素瘤移植瘤的增殖情况、体积,统计并分析对照组和实验组之间恶性黑色素移植瘤的体积差异,绘制肿瘤生长曲线。采用实时荧光定量RT-PCR检测法测定裸鼠恶性黑色素移植瘤中Ang2基因的相对表达量,统计并分析对照组和实验组之间Ang2基因的表达水平差异和肿瘤增殖程度之间的关系。用Western blot法检测Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒对裸鼠体内VEGF、Akt及PI3K蛋白表达的影响。采用免疫组织化学法检测恶性黑色素移植瘤的微血管密度,统计并分析对照组与实验组之间的差异及其与肿瘤生长、增殖的关系。用Tunel染色法检测裸鼠恶性黑色素移植瘤的细胞凋亡率。结果成功构建了人恶性黑色素裸鼠移植瘤模型,对照组和实验组的裸鼠给药后均未出现死亡。实验组移植瘤平均体积为1200.81±267.32mm3,显著小于对照组6312.01±914.62 mm3;通过实时荧光定量RT-PCR结果可知,Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒在抑制裸鼠恶性黑色素移植瘤细胞中的Ang2基因表达方面有显著效果,实验组移植瘤Ang2基因及蛋白的相对表达水平显著低于对照组,其基因表达抑制率达37.33%;利用MVD计数法可知实验组肿瘤微血管密度为11.52±0.93个/HP,对照组肿瘤微血管密度为15.67±1.51个/HP,实验组肿瘤的微血管密计数度显著低于对照组;采用Tunel染色法测得实验组恶性移植瘤细胞凋亡率为5.35±1.81%,对照组恶性黑色素移植瘤细胞凋亡率为3.32±0.97%,实验组恶性黑色素移植瘤的细胞凋亡率显著高于对照组;Ang2-siRNA磁性纳米微粒对移植瘤细胞内VEGF、Akt及PI3K蛋白的表达无显著作用。结论利用Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米复合微粒作为靶向基因治疗的载体,干扰、降低Ang2的表达,以抑制恶性黑色素瘤血管的发生、生长,可以延缓恶性黑色素瘤的增殖、发展。