【摘 要】
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目的观察雷帕霉素激活自噬对钛颗粒诱导下骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨能力的影响。方法分别以0、1、5、10、20、50、100nM浓度雷帕霉素培养C57小鼠BMSCs细胞48小时,CCK8法检测不同浓度雷帕霉素处理后在各时间点的细胞活力,确定最佳作用时间及浓度;设置对照组,选用最佳浓度的雷帕霉素(10nM)处理骨髓间充质干细胞24小时后western blot法检测自噬相关蛋白Atg5、LC-
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目的观察雷帕霉素激活自噬对钛颗粒诱导下骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨能力的影响。方法分别以0、1、5、10、20、50、100nM浓度雷帕霉素培养C57小鼠BMSCs细胞48小时,CCK8法检测不同浓度雷帕霉素处理后在各时间点的细胞活力,确定最佳作用时间及浓度;设置对照组,选用最佳浓度的雷帕霉素(10nM)处理骨髓间充质干细胞24小时后western blot法检测自噬相关蛋白Atg5、LC-3Ⅰ/Ⅱ表达水平,确定骨髓间充质干细胞自噬情况;之后实验分为4组:A组:成骨诱导分化培养基,B组:成骨诱导分化培养基+钛颗粒,C组:成骨诱导分化培养基+雷帕霉素,D组:成骨诱导分化培养基+钛颗粒+雷帕霉素。成骨分化培养各组细胞共21天,ALP含量在第7、14、21d时检测,各组的钙沉积用茜素红染色法检测;各组成骨分化相关蛋白Runx2和OCN的表达水平用western blot法检测。结果10nM的雷帕霉素处理C57小鼠BMSCs24h时,细胞活力最佳;以10nM浓度的雷帕霉素处理BMSCs24h后,Atg5、LC3-Ⅰ/Ⅱ表达量较对照组明显增高;B组ALP活性、钙沉积量、Runx2和OCN表达水平较A组明显降低(P<0.05),C组ALP活性、钙沉积量、Runx2和OCN表达水平明显高于其余各组(P<0.05),而D组ALP活性、钙沉积量、Runx2和OCN表达水平较C组低(P<0.05)。结论:钛颗粒抑制骨髓间充质干细胞向成骨分化的能力,而雷帕霉素可有效减轻钛颗粒对BMSCs成骨分化能力抑制,这可能与其增强骨髓间充质干细胞自噬水平有关。
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