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玉米赤霉烯酮(ZEA),过去又称F-2毒素,是由禾谷镰刀菌、黄色镰刀菌、木贼镰刀菌和半裸镰刀菌等镰刀菌属真菌产生的一种非类固醇类,但具有雌激素样活性的真菌毒素。ZEA广泛存在于霉变的玉米、小麦、高粱等谷类作物、发霉的饲料以及被污染的肉、奶等动物性食品中。动物摄食ZEA后,最易引发生殖毒性。近几年,已有少数体内外实验证实ZEA对机体免疫系统亦有毒性作用,但其作用机制尚未阐明。ZEA对免疫系统的危害是通过神经—内分泌—免疫网络来实现,还是直接毒害免疫细胞、免疫器官来实现,或者两种方式均有,这些都有待阐明。为探讨ZEA对离体培养的小鼠胸腺细胞、胸腺上皮细胞及脾脏淋巴细胞的作用,本文以1月龄昆明小鼠为研究对象,采用MTT法、台盼蓝活细胞计数法、电镜技术、Hoechst 33258染色分析、线粒体活性分析、线粒体膜电位测定、DNA Ladder分析以及流式细胞仪分析等方法,离体研究ZEA对胸腺细胞、胸腺上皮细胞及脾脏淋巴细胞的增殖、细胞凋亡与细胞周期的影响,结果如下:
(1)不同浓度(1~25μg/mL)ZEA对离体培养PHA-P活化小鼠胸腺细胞增殖均具有显著抑制作用(p<0.05)。在培养早期阶段,这种抑制作用与其剂量及处理时间呈依赖性关系。
(2)小鼠胸腺细胞经ZEA处理后,出现核染色质凝聚(核固缩)、DNA断裂等典型细胞凋亡特征。
(3)不同浓度(1~25μg/mL)ZEA对离体培养小鼠胸腺细胞具有显著促凋亡作用(p<0.05)。在培养早期阶段,促进作用与其剂量呈依赖性关系。
(4)高剂量(10~25μg/mL)ZEA对小鼠胸腺上皮细胞的增殖均具有显著抑制作用(p<0.05),但与其剂量和培养时间相关性不强。低剂量(0.01~5μg/mL)ZEA对小鼠胸腺上皮细胞的增殖也表现出一定程度的抑制作用。ZEA可改变小鼠胸腺上皮细胞的一些培养特性,如细胞体积变大、贴壁能力增强等。
(5)高剂量(10~25μg/mL)ZEA使小鼠胸腺上皮细胞细胞周期显著阻滞于G2/M期(p<0.05),并可能存在剂量依赖性。低剂量(0.01~5μg/mL)ZEA对小鼠胸腺上皮细胞细胞周期基本无影响。
(6)高剂量(10-25 μg/mL)ZEA显著增强小鼠胸腺上皮细胞线粒体代谢MTT能力、增加小鼠胸腺上皮细胞线粒体数量、增强线粒体活性、使线粒体膜电位升高。
(7)ZEA对离体培养LPS活化小鼠脾脏淋巴细胞增殖具有显著抑制作用(p<0.05),且抑制强度与其剂量呈依赖性关系。
(8)小鼠脾脏淋巴细胞经ZEA处理后,出现DNA断裂等典型细胞凋亡特征。
(9)ZEA对离体培养LPS活化小鼠脾脏淋巴细胞具有显著促凋亡作用(p<0.05),且促进强度与其剂量呈依赖性关系。
结论:玉米赤霉烯酮对中枢免疫器官胸腺和外周免疫器官脾脏有直接毒害作用,危害机体健康。