【摘 要】
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在我们以前的工作中,我们实验室报导了新基因TH1编码产物,TH1蛋白,无论在体外和体内都能够特异的与Raf激酶家族中的A-Raf激酶结合,而非B-Raf或C-Raf[1].目前TH1功能未知,为进
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在我们以前的工作中,我们实验室报导了新基因TH1编码产物,TH1蛋白,无论在体外和体内都能够特异的与Raf激酶家族中的A-Raf激酶结合,而非B-Raf或C-Raf[1].目前TH1功能未知,为进一步研究其可能具有的生物学功能,我们首先构建了一系列TH1的缺失突变体,通过酵母系统和GST-pulldown实验证实了TH1蛋白N端1-392氨基酸组成的区域对于这种结合是至关重要的.在HEK293和SMMC-7721肝癌细胞中,A-Raf受到血清刺激或癌基因Ras和Src激活后表现为与TH1蛋白的结合增强.这促使我们进一步研究TH1与A-Raf的结合究竟会对A-Raf的激酶活性产生什么影响.我们发现在上述细胞系中过表达TH1后,A-Raf的激酶活性明显下降,并有明显的剂量依赖关系.而B-Raf和C-Raf激酶活性并不受影响.Northern检测显示A-Raf的mRNA水平有一定的下调,而Western检测不到A-Raf蛋白水平的明显变化,这表明TH1可能在mRNA水平影响了A-Raf的表达,但并没有影响到A-Raf的蛋白水平.上述结果提示了TH1蛋白可能作为A-Raf特异作用的蛋白发挥了对A-Raf的调节作用,这种现象引起了我们的极大兴趣,促使我们进一步观察TH1是否籍此影响了Raf/MEK/ERK这条通路而对细胞的生物学行为产生影响.通过构建稳定表达TH1的细胞株,经过流式细胞仪检测后,我们发现细胞在G0/G1期增多而S期细胞数明显减少,这与我们观察到的细胞生长速度减缓现象是一致的.
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